| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-47页 |
| 1.1 辽东楤木研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1.1 辽东楤木植物资源学的研究 | 第15-16页 |
| 1.1.2. 辽东楤木植物化学成分的研究 | 第16-17页 |
| 1.1.3 辽东楤木药理学的研究 | 第17-19页 |
| 1.1.4 辽东楤木生物技术的研究 | 第19-20页 |
| 1.2 利用生物工程生产次生代谢产物的研究进展 | 第20-32页 |
| 1.2.1 植物次生代谢产物 | 第20-27页 |
| 1.2.2 药用植物有效成分的细胞生产 | 第27-28页 |
| 1.2.3 毛状根生产药用植物有效成分 | 第28-29页 |
| 1.2.4 酵母生产次生代谢产物 | 第29-32页 |
| 1.3 三萜皂苷生物合成途径限速酶研究进展 | 第32-47页 |
| 1.3.1 三萜皂苷及其合成途径 | 第32-36页 |
| 1.3.2 法呢基焦磷酸合成酶基因(FPS)研究进展 | 第36-41页 |
| 1.3.3 β-香树脂合成酶基因(β-AS)研究进展 | 第41-47页 |
| 第2章 辽东楤木法呢基焦磷酸合成酶基因的克隆及原核表达 | 第47-77页 |
| 2.1 材料 | 第48-52页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第48-49页 |
| 2.1.2 菌株和克隆载体 | 第49页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第49页 |
| 2.1.4 实验所需试剂及培养基的配制 | 第49-52页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第52页 |
| 2.2 实验方法 | 第52-63页 |
| 2.2.1 辽东楤木法呢基焦磷酸合成酶基因的克隆 | 第52-58页 |
| 2.2.2 FPS原核表达 | 第58-63页 |
| 2.3 结果与分析 | 第63-74页 |
| 2.3.1 AeFPS基因的克隆与序列分析 | 第63-70页 |
| 2.3.2 辽东楤木FPS原核表达 | 第70-74页 |
| 2.4 讨论 | 第74-77页 |
| 第3章 辽东楤木B-香树素合成酶基因的克隆及原核表达 | 第77-97页 |
| 3.1 材料与方法 | 第77-78页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第77-78页 |
| 3.1.2 菌株和克隆载体 | 第78页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第78页 |
| 3.1.4 实验所需试剂及培养基的配制 | 第78页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第78页 |
| 3.2 实验方法 | 第78-84页 |
| 3.2.1 辽东楤木β-AS基因的克隆 | 第78-81页 |
| 3.2.2 β-AS基因的原核表达 | 第81-84页 |
| 3.3 结果与分析 | 第84-95页 |
| 3.3.1 β-AS基因的克隆与序列分析 | 第84-91页 |
| 3.3.2 辽东楤木β-AS原核表达 | 第91-95页 |
| 3.4 讨论 | 第95-97页 |
| 第4章 辽东楤木三萜合成相关基因的表达分析 | 第97-107页 |
| 4.1 材料与方法 | 第97-98页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第97页 |
| 4.1.2 试剂盒及购买的试剂 | 第97-98页 |
| 4.1.3 仪器和设备 | 第98页 |
| 4.2 实验方法 | 第98-100页 |
| 4.2.1 各组织器官的RNA提取 | 第98页 |
| 4.2.2 各组织器官的cDNA合成 | 第98页 |
| 4.2.3 特异引物的设计和合成 | 第98-99页 |
| 4.2.4 荧光定量PCR | 第99-100页 |
| 4.2.5 计算方法 | 第100页 |
| 4.3 结果与分析 | 第100-104页 |
| 4.3.1 辽东楤木根、茎、叶、花总RNA的提取 | 第100页 |
| 4.3.2 cDNA的合成 | 第100-101页 |
| 4.3.3 PCR鉴定 | 第101-102页 |
| 4.3.4 样品特异扩增的产物确定 | 第102页 |
| 4.3.5 不同组织样品GAPDH、FPS和β-AS基因的扩增结果 | 第102-103页 |
| 4.3.6 定量结果的数据统计 | 第103-104页 |
| 4.4 讨论 | 第104-107页 |
| 4.4.1 实时荧光定量PCR技术 | 第104页 |
| 4.4.2 内参基因的选择 | 第104-105页 |
| 4.4.3 引物的设计 | 第105页 |
| 4.4.4 材料的选择 | 第105页 |
| 4.4.5 分析结果 | 第105-107页 |
| 第5章 B-香树素合成酶基因在真核生物酵母中的表达 | 第107-123页 |
| 5.1 材料 | 第108-110页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第108页 |
| 5.1.2 试剂 | 第108页 |
| 5.1.3 主要试剂的配制 | 第108-109页 |
| 5.1.4 实验器材 | 第109-110页 |
| 5.2 实验方法 | 第110-116页 |
| 5.2.1 目的基因的扩增 | 第110-112页 |
| 5.2.2 酵母重组子表达载体的构建 | 第112-113页 |
| 5.2.3 酵母转化子的PCR鉴定 | 第113-115页 |
| 5.2.4 外源基因表达蛋白的SDS-PAGE和Western blot印迹检测 | 第115页 |
| 5.2.5 目标代谢产物β-香树素的HPLC测定 | 第115-116页 |
| 5.3 结果与分析 | 第116-120页 |
| 5.3.1 重组质粒pGM-T-AS的构建与鉴定 | 第116-117页 |
| 5.3.2 目的基因酵母表达载体的构建 | 第117-118页 |
| 5.3.3 酵母转化子pPIC9K-AS的分子检测 | 第118-119页 |
| 5.3.4 目标蛋白的SDS-PAGE分析及Western blot检测 | 第119页 |
| 5.3.5 酵母转化子的目标代谢产物的测定 | 第119-120页 |
| 5.4 讨论 | 第120-123页 |
| 5.4.1 选择毕赤酵母生产次生代谢产物 | 第120-121页 |
| 5.4.2 分步酶切的选择 | 第121页 |
| 5.4.3 HPLC标准品的选择 | 第121-123页 |
| 第6章 结论 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-139页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
