| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第8-12页 |
| 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 植物黄酮 | 第12-13页 |
| 2 植物类黄酮的生物合成及其代谢调控 | 第13-14页 |
| 3 植物MYB转录因子 | 第14-17页 |
| 3.1 植物MYB转录因子的结构及其分类 | 第14-15页 |
| 3.2 MYB转录因子结合位点的多元化 | 第15页 |
| 3.3 R2R3-MYB转录因子的功能 | 第15-17页 |
| 3.3.1 参与次生代谢调控 | 第15-16页 |
| 3.3.2 参与调控激素应答和逆境胁迫 | 第16页 |
| 3.3.3 调控植物细胞的形态与模式构建 | 第16页 |
| 3.3.4 对花青素合成的调控 | 第16-17页 |
| 4 苦荞类黄酮及其代谢及其调控的研究 | 第17-18页 |
| 5 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 苦荞FtMYB3转录因子的分子鉴定 | 第19-34页 |
| 1 材料与方法 | 第19-27页 |
| 1.1 材料 | 第19页 |
| 1.1.1 实验材料与仪器 | 第19页 |
| 1.1.2 载体与菌株 | 第19页 |
| 1.2 培养基 | 第19-21页 |
| 1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.4 方法 | 第22-27页 |
| 1.4.1 Southern blot | 第22-24页 |
| 1.4.2 YFP融合表达载体的构建 | 第24页 |
| 1.4.3 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第24-26页 |
| 1.4.4 苦荞总RNA抽提与cDNA第一链制备 | 第26页 |
| 1.4.5 半定量RT-PCR | 第26-27页 |
| 1.4.6 半定量PCR的产物分析 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.1 苦荞FtMYB3的基因拷贝数鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2 FtMYB3与黄色荧光蛋白融合表达的重组质粒的构建 | 第28页 |
| 2.2.1 YFP-FtMYB3融合表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.3 重组质粒在洋葱表皮细胞中的瞬时表达 | 第28-29页 |
| 2.4 苦荞总RNA抽提与cDNA第一链制备 | 第29-30页 |
| 2.5 苦荞黄酮合成相关基因的时空表达分析 | 第30-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 苦荞FtMYB3转基因功能鉴定 | 第34-47页 |
| 1 材料与方法 | 第34-41页 |
| 1.1 实验材料与仪器 | 第34页 |
| 1.2 工具酶及主要试剂 | 第34页 |
| 1.3 植物激素 | 第34-35页 |
| 1.4 培养基的配置 | 第35-36页 |
| 1.4.1 细菌培养基 | 第35页 |
| 1.4.2 植物培养基 | 第35-36页 |
| 1.4.2.1 MS培养基 | 第35-36页 |
| 1.4.3 各种培养基的配置方法 | 第36页 |
| 1.5 方法 | 第36-41页 |
| 1.5.1 FtMYB3植物表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 1.5.2 FtMYB3植物表达载体转化农杆菌 | 第37-38页 |
| 1.5.3 农杆菌介导的烟草的遗传转化 | 第38页 |
| 1.5.4 转基因烟草的筛选 | 第38-39页 |
| 1.5.5 转基因烟草中黄酮合成关键酶基因的表达量分析 | 第39页 |
| 1.5.6 转基因烟草中总黄酮检测 | 第39-41页 |
| 1.5.7 转基因烟草花青素含量的测定 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-44页 |
| 2.1 FtMYB3植物表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.2 转基因烟草的筛选和鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.1 转基因烟草中黄酮合成关键酶基因表达量分析 | 第42页 |
| 2.2.2 转基因烟草黄酮含量的测定 | 第42-43页 |
| 2.2.3 转基因烟草的花色观察 | 第43-44页 |
| 2.2.4 转基因烟草花青素的含量测定 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-47页 |
| 第四章 苦荞FtMYB3结合顺式作用元件的分子鉴定 | 第47-72页 |
| 1 材料和方法 | 第47-63页 |
| 1.1 主要仪器 | 第47页 |
| 1.2 菌种及载体 | 第47页 |
| 1.3 主要试剂和药品 | 第47-48页 |
| 1.4 溶液配置 | 第48-51页 |
| 1.5 平板配制 | 第51-52页 |
| 1.6 方法 | 第52-63页 |
| 1.6.1 苦荞FtMYB3基因原核表达载体的构建 | 第52页 |
| 1.6.2 苦荞FtMYB3在大肠杆菌中的表达 | 第52-53页 |
| 1.6.3 FtMYB3重组蛋白的SDS-PAGE | 第53页 |
| 1.6.4 重组蛋白的亲和层析 | 第53页 |
| 1.6.5 FtMYB3截短蛋白的获得 | 第53-54页 |
| 1.6.6 苦荞FtMYB3结合顺式作用元件的筛选 | 第54-62页 |
| 1.6.7 苦荞FtMYB3与顺式作用元件相互作用的鉴定 | 第62-63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-69页 |
| 2.1 苦荞FtMYB3基因原核表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 2.2 苦荞FtMYB3在大肠杆菌中的诱导表达 | 第64页 |
| 2.3 苦荞FtMYB3蛋白的纯化 | 第64-65页 |
| 2.4 蛋白质浓度测定 | 第65页 |
| 2.5 随机结合序列基因文库及其捕获载体的构建 | 第65-66页 |
| 2.6 苦荞FtMYB3诱饵载体的构建 | 第66-67页 |
| 2.7 基因库的筛选 | 第67-68页 |
| 2.8 苦荞FtMYB3与顺式作用元件相互作用的鉴定 | 第68-69页 |
| 3. 讨论 | 第69-72页 |
| 结论与创新点 | 第72-73页 |
| 1 结论 | 第72页 |
| 2 本研究的创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第82页 |
