| 摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 缩略词表 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-33页 |
| 1 GDF9研究进展 | 第18-25页 |
| 1.1 GDF9基本结构 | 第18-19页 |
| 1.2 GDF9信号转导通路 | 第19-21页 |
| 1.3 GDF9对卵泡发育的调控 | 第21-24页 |
| 1.3.1 生长因子对卵泡发育的调控作用 | 第21-23页 |
| 1.3.2 GDF9对卵泡发育的影响 | 第23-24页 |
| 1.4 GDF9对睾丸发育和精子发生的影响 | 第24-25页 |
| 2 腔前卵泡体外培养研究进展 | 第25-27页 |
| 2.1 卵泡生长发育的一般规律和调控模式 | 第25-26页 |
| 2.2 体外腔前卵泡培养研究进展 | 第26-27页 |
| 3 睾丸支持细胞与精子发生 | 第27-31页 |
| 3.1 精子发生的过程及基因表达调控 | 第27-29页 |
| 3.2 睾丸支持细胞在精子发生中的作用 | 第29-31页 |
| 4 研究目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二部分 试验研究 | 第33-95页 |
| 实验一 牛GDF9基因多态性及其与超数排卵效果的关系 | 第34-47页 |
| 1 引言 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第35页 |
| 2.1.2 试验样品的采集 | 第35页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.1.4 主要酶、试剂和试剂盒 | 第36页 |
| 2.1.5 主要溶液的配置 | 第36-37页 |
| 2.2 研究方法 | 第37-41页 |
| 2.2.1 中国荷斯坦奶牛超数排卵处理程序 | 第37页 |
| 2.2.2 冲胚及数据收集 | 第37-38页 |
| 2.2.3 牛基因组DNA的提取及检测 | 第38页 |
| 2.2.4 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第38页 |
| 2.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测 | 第38-39页 |
| 2.2.6 PCR-SSCP检测 | 第39页 |
| 2.2.7 目的片段回收纯化 | 第39页 |
| 2.2.8 引物设计及PCR反应条件 | 第39-40页 |
| 2.2.9 酶切位点的引入与基因分型 | 第40-41页 |
| 2.3 统计分析 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-44页 |
| 3.1 基因组DNA提取物 | 第41页 |
| 3.2 GDF9基因PCR扩增产物 | 第41-42页 |
| 3.3 GDF9基因SSCP多态性 | 第42页 |
| 3.4 GDF9基因RFLP多态性 | 第42-43页 |
| 3.5 GDF9基因型频率和等位基因频率 | 第43页 |
| 3.6 GDF9基因多态性与奶牛超数排卵效果的关系 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 GDF9基因突变对超数排卵的影响 | 第44-45页 |
| 4.2 GDF9基因突变影响超数排卵的机制解析 | 第45-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 实验二：牛GDF9基因多态性及其与胚胎移植妊娠率的关系 | 第47-54页 |
| 1 引言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-49页 |
| 2.1 材料 | 第48页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第48页 |
| 2.1.2 试验样品的采集 | 第48页 |
| 2.2 方法 | 第48-49页 |
| 2.2.1 受体牛同期发情处理 | 第48-49页 |
| 2.2.2 胚胎移植及妊娠检查 | 第49页 |
| 2.2.3 基因组DNA提取 | 第49页 |
| 2.2.4 GDF9基因多态性检测 | 第49页 |
| 2.2.5 血清激素浓度的测定 | 第49页 |
| 2.2.6 数据统计 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-52页 |
| 3.1 GDF9基因PCR扩增产物 | 第49-50页 |
| 3.2 GDF9基因多态性 | 第50页 |
| 3.3 GDF9基因型频率和等位基因频率 | 第50-51页 |
| 3.4 GDF9基因多态性与冷冻胚胎移植妊娠率的关系 | 第51页 |
| 3.5 GDF9基因多态性与胚胎移植时受体血清激素的关系 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.1 GDF9基因在鲁西黄牛群体中具有多态性 | 第52页 |
| 4.2 GDF9基因突变与胚胎移植妊娠率关系不大 | 第52-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 实验三：外源GDF9对牛腔前卵泡体外培养效果的影响 | 第54-65页 |
| 1 引言 | 第54-55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-58页 |
| 2.1 材料 | 第55-56页 |
| 2.1.1 实验材料及仪器设备 | 第55页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第55-56页 |
| 2.2 方法 | 第56-58页 |
| 2.2.1 卵巢皮质的获得 | 第56页 |
| 2.2.2 试验设计与培养条件 | 第56-57页 |
| 2.2.3 组织学检测 | 第57-58页 |
| 2.2.4 TUNEL检测 | 第58页 |
| 2.2.5 统计分析 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-63页 |
| 3.1 腔前卵泡活力 | 第58-61页 |
| 3.2 原始卵泡的激活和生长 | 第61-62页 |
| 3.3 腔前卵泡生长 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 5 小结 | 第64-65页 |
| 实验四：牛GDF9基因多态性及其与精液品质的关系 | 第65-72页 |
| 1 引言 | 第65-66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-67页 |
| 2.1 试验动物与数据收集 | 第66页 |
| 2.2 试验方法 | 第66-67页 |
| 2.2.1 牛冻精基因组DNA提取 | 第66页 |
| 2.2.2 GDF9基因多态性检测 | 第66页 |
| 2.2.3 统计分析 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-70页 |
| 3.1 GDF9基因PCR扩增产物 | 第67页 |
| 3.2 GDF9基因多态性 | 第67-68页 |
| 3.3 GDF9基因型频率和等位基因频率 | 第68页 |
| 3.4 GDF9基因多态性与荷斯坦种公牛精液品质的关系 | 第68-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 5 小结 | 第71-72页 |
| 实验五：GDF9及其受体在牛睾丸、睾丸支持细胞中的鉴定 | 第72-83页 |
| 1 引言 | 第72-73页 |
| 2 材料与方法 | 第73-79页 |
| 2.1 材料 | 第73-74页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第73页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第73-74页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第74页 |
| 2.2 实验方法 | 第74-79页 |
| 2.2.1 牛睾丸支持细胞的分离与培养 | 第74页 |
| 2.2.2 牛睾丸组织与支持细胞总RNA提取及检测 | 第74-75页 |
| 2.2.3 cDNA第一链合成 | 第75页 |
| 2.2.4 PCR反应程序和产物检测 | 第75-76页 |
| 2.2.5 蛋白的提取及Western blot检测 | 第76-78页 |
| 2.2.6 免疫组织化学染色 | 第78-79页 |
| 3 结果 | 第79-82页 |
| 3.1 牛睾丸组织和支持细胞中提取总RNA质量检测 | 第79页 |
| 3.2 GDF9及其受体在牛睾丸支持细胞中的表达 | 第79-80页 |
| 3.3 GDF9及其受体在牛睾丸组织中的表达 | 第80页 |
| 3.4 GDF9蛋白在牛睾丸组织和支持细胞中的表达与分布 | 第80-82页 |
| 4 讨论 | 第82页 |
| 5 小结 | 第82-83页 |
| 实验六：外源GDF9对牛睾丸支持细胞发育和功能的影响 | 第83-95页 |
| 1 引言 | 第83-84页 |
| 2 材料与方法 | 第84-88页 |
| 2.1 材料 | 第84页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第84页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第84页 |
| 2.1.3 主要试剂及配置 | 第84页 |
| 2.2 实验方法 | 第84-88页 |
| 2.2.1 牛睾丸支持细胞的分离与培养 | 第84页 |
| 2.2.2 外源GDF9的处理 | 第84-85页 |
| 2.2.3 牛支持细胞总RNA提取及反转录 | 第85页 |
| 2.2.4 细胞周期检测 | 第85页 |
| 2.2.5 细胞凋亡检测 | 第85页 |
| 2.2.6 细胞增殖检测 | 第85-86页 |
| 2.2.7 跨膜电阻值测定 | 第86页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR | 第86-87页 |
| 2.2.9 统计分析 | 第87-88页 |
| 3 结果 | 第88-93页 |
| 3.1 GDF9影响牛支持细胞周期 | 第88-90页 |
| 3.2 GDF9促进牛支持细胞增殖 | 第90-91页 |
| 3.3 GDF9抑制牛支持细胞凋亡 | 第91页 |
| 3.5 GDF9对牛occludin和claudin-11 mRNA表达的影响 | 第91-92页 |
| 3.6 GDF9对牛支持细胞紧密连接能力的影响 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-94页 |
| 5 小结 | 第94-95页 |
| 第三部分 全文结论 | 第95-97页 |
| 第四部分 创新点和不足 | 第97-98页 |
| 本研究的创新之处 | 第97页 |
| 本研究的不足之处 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-122页 |
| 发表的主要论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
