| 致谢 | 第1-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述(p53在生精细胞凋亡过程中的作用) | 第17-28页 |
| ·引言 | 第17-18页 |
| ·精子发生 | 第18页 |
| ·细胞凋亡 | 第18-19页 |
| ·精子发生过程中的生精细胞凋亡 | 第19-21页 |
| ·精子发生过程中凋亡的生精细胞类型 | 第20页 |
| ·精子发生过程中生精细胞凋亡的诱导因素 | 第20页 |
| ·精子发生过程中生精细胞凋亡的意义 | 第20-21页 |
| ·精子发生过程中p53的功能研究 | 第21-25页 |
| ·精子发生过程中p53的表达模式 | 第21页 |
| ·精子发生过程中p53功能研究模型 | 第21-25页 |
| ·p53基因敲除模型 | 第22页 |
| ·隐睾病模型 | 第22-23页 |
| ·p53过表达模型 | 第23-25页 |
| ·p53参与生精细胞凋亡的分子机制 | 第25-27页 |
| ·结论 | 第27-28页 |
| 第二章 东方蝾螈精子超微结构研究 | 第28-39页 |
| ·引言 | 第28-30页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·试剂和仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·透射电镜 | 第31-32页 |
| ·透射电镜包埋块制作 | 第31页 |
| ·透射电镜超薄切片制作 | 第31-32页 |
| ·透射电镜切片染色及观察 | 第32页 |
| ·扫描电镜 | 第32-33页 |
| ·扫面电镜和透射电镜结果 | 第33-37页 |
| ·东方蝾螈精子扫描电镜结果 | 第33-34页 |
| ·东方蝾螈精子透射电镜结果 | 第34-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·结论 | 第38-39页 |
| 第三章 东方蝾螈精子发生过程中生精细胞凋亡及分子机制 | 第39-86页 |
| ·引言 | 第39-42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验动物 | 第42页 |
| ·试剂和仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-59页 |
| ·东方蝾螈精巢p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7 cDNA克隆 | 第43-54页 |
| ·兼并引物设计 | 第43-44页 |
| ·cDNA序列克隆流程 | 第44-45页 |
| ·引物序列(兼并引物和特异性引物) | 第45-46页 |
| ·组织总RNA提取 | 第46-47页 |
| ·不同种类cDNA合成 | 第47-49页 |
| ·不同类型PCR程序 | 第49-52页 |
| ·基因产物电泳检测、回收和纯化 | 第52-54页 |
| ·基因产物与载体连接和克隆检测 | 第54页 |
| ·克隆载体转化与检测 | 第54页 |
| ·cDNA序列和蛋白结构分析 | 第54-55页 |
| ·cDNA序列分析 | 第54页 |
| ·蛋白质序列和结构分析 | 第54-55页 |
| ·p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7组织表达分析 | 第55页 |
| ·东方蝾螈镉暴露、热休克、冷休克及饥饿处理 | 第55-56页 |
| ·东方蝾螈精巢生精细胞凋亡检测 | 第56页 |
| ·精巢中p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7压力处理后表达水平检测 | 第56-57页 |
| ·RNA提取 | 第56页 |
| ·cDNA模板合成 | 第56-57页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第57页 |
| ·东方蝾螈精巢中Caspase酶活性测定 | 第57-59页 |
| ·结果 | 第59-79页 |
| ·p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7 cDNA和蛋白序列 | 第59-66页 |
| ·p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7蛋白多序列比对和进化分析 | 第66-70页 |
| ·p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7蛋白结构预测 | 第70-73页 |
| ·p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7组织特异性表达 | 第73-74页 |
| ·东方蝾螈经过外界压力处理后生精细胞凋亡模式 | 第74-76页 |
| ·精巢中p53,Apaf1,Caspase3和Caspase7基因表达水平 | 第76-78页 |
| ·东方蝾螈精巢Caspase3,Caspase8和Caspase9酶活性检测结果 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-84页 |
| ·东方蝾螈精巢中p53,Apaf1,Caspase3和Caspse7高度保守 | 第79-80页 |
| ·东方蝾螈精巢中生精细胞自发性凋亡 | 第80页 |
| ·Caspase3和caspase7参与了东方蝾螈生精细胞凋亡 | 第80-81页 |
| ·饥饿诱导生精细胞凋亡可能的分子机制 | 第81页 |
| ·镉暴露诱导生精细胞凋亡可能的分子机制 | 第81-82页 |
| ·热休克和冷休克诱导生精细胞凋亡可能的分子机制 | 第82-83页 |
| ·成熟精子凋亡可能的分子机制 | 第83-84页 |
| ·结论 | 第84-86页 |
| 第四章 KIFC1和Nup62在东方蝾螈精子形成中的作用 | 第86-138页 |
| ·引言 | 第86-91页 |
| ·实验材料 | 第91-92页 |
| ·实验动物 | 第91页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第91-92页 |
| ·实验方法 | 第92-114页 |
| ·KIFC1和Nup62 cDNA克隆 | 第92-94页 |
| ·KIFC1和Nup62兼并引物设计 | 第92-94页 |
| ·组织RNA提取、cDNA合成、RT-PCR和RACE | 第94页 |
| ·KIFC1和Nup62 cDNA及蛋白序列分析 | 第94-95页 |
| ·cDNA序列分析 | 第94页 |
| ·蛋白多序列比对、系统进化分析以及蛋白结构分析和预测 | 第94-95页 |
| ·KIFC1和Nup62组织特异性表达分析 | 第95页 |
| ·KIFC1蛋白原核表达 | 第95-102页 |
| ·KIFC1-pMD18-T克隆载体构建 | 第95-98页 |
| ·KIFC1抗原片段扩增、回收和纯化 | 第95-97页 |
| ·KIFC1克隆载体的转化和测序 | 第97-98页 |
| ·克隆质粒(KIFC1-pMD18-T)抽提 | 第98-99页 |
| ·KIFC1原核表达载体构建 | 第99-100页 |
| ·pET28a-KIFC1原核表达质粒抽提 | 第100-101页 |
| ·pET28a-KIFC1质粒转化蛋白表达菌株 | 第101页 |
| ·pET28a-KIFC1融合蛋白原核表达诱导 | 第101-102页 |
| ·pET28a-KIFC1融合蛋白原核表达结果分析 | 第102页 |
| ·pET28a-KIFC1融合蛋白纯化 | 第102-105页 |
| ·pET28a-KIFC1融合蛋白包涵体处理 | 第102页 |
| ·pET28a-KIFC1融合蛋白的纯化(小量尝试) | 第102-103页 |
| ·pET28a-KIFC1融合蛋白的大批量纯化 | 第103-105页 |
| ·KIFC1多克隆抗体制备(杭州华安生物技术有限公司提供) | 第105-108页 |
| ·ELISA检测操作记录表(血清抗体滴度检测) | 第105页 |
| ·Western Blot检测操作记录表(血清抗体特异性检测) | 第105-106页 |
| ·多克隆抗体纯化 | 第106页 |
| ·ELISA检测操作记录表(半成品) | 第106-107页 |
| ·Western Blot检测操作记录表(半成品) | 第107-108页 |
| ·Western Blot检测成品抗体的特异性和效果 | 第108页 |
| ·免疫印记 | 第108-111页 |
| ·动物组织蛋白抽提 | 第108-109页 |
| ·蛋白浓度测定(BCA测定法) | 第109页 |
| ·蛋白电泳 | 第109-110页 |
| ·蛋白转膜 | 第110页 |
| ·EC1显色和胶片曝光 | 第110-111页 |
| ·免疫荧光 | 第111-112页 |
| ·组织包埋块制作与切片 | 第111页 |
| ·抗体孵育与结果观察 | 第111-112页 |
| ·免疫电镜 | 第112-114页 |
| ·取材与固定 | 第112-113页 |
| ·切片与染色 | 第113-114页 |
| ·结果 | 第114-131页 |
| ·东方蝾螈KIFC1和Nup62 cDNA序列 | 第114-117页 |
| ·KIFC1和Nup62蛋白序列比对和系统进化树分析结果 | 第117-121页 |
| ·KIFC1和Nup62功能结构域和三级结构序列分析 | 第121-122页 |
| ·KIFC1和Nup62基因组织特异性表达分析 | 第122-124页 |
| ·KIFC1原核蛋白表达诱导和纯化 | 第124-125页 |
| ·KIFC1抗体制作结果 | 第125页 |
| ·KIFC1和Nup62在东方蝾螈精巢中的表达 | 第125-126页 |
| ·精子形成中KIFC1和Nup62细胞定位 | 第126-127页 |
| ·精子形成中KIFC1和微管细胞定位 | 第127-128页 |
| ·精子形成中KIFC1和GM130细胞定位 | 第128-129页 |
| ·KIFC1在生精细胞超微结构中定位和分布模式 | 第129-131页 |
| ·讨论 | 第131-137页 |
| ·KIFC1和Nup62保守性 | 第131-132页 |
| ·KIFC1在精子形成中的作用 | 第132-137页 |
| ·KIFC1参与了东方蝾螈顶体发生过程 | 第133-134页 |
| ·KIFC1参与了东方蝾螈精细胞核质之间的物质运输 | 第134-135页 |
| ·KIFC1参与了东方蝾螈精子形成中细胞核形变过程 | 第135-136页 |
| ·东方蝾螈成熟精子KIFC1可能的作用 | 第136-137页 |
| ·结论 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-149页 |
| 作者简介 | 第149页 |
