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靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF1和ORF7 shRNA重组慢病毒的构建与鉴定

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-10页
第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展第10-30页
 1 PRRSV的生物学特性第10-11页
 2. PRRSV基因编码的蛋白第11-15页
   ·非结构蛋白第11-12页
   ·结构蛋白第12-15页
 3 PRRSV的免疫学特性第15-16页
   ·体液免疫第15页
   ·细胞免疫第15-16页
 4 疫苗研究第16-18页
   ·PRRSV新型佐剂疫苗第16-17页
   ·载体疫苗第17页
   ·DNA疫苗第17-18页
 参考文献第18-30页
第二章 慢病毒介导的RNA干扰研究进展第30-52页
 1 RNAI的分子机制第30-33页
   ·小干扰RNA第31-32页
   ·微小RNA第32-33页
 2 sIRNA靶序列的设计和制备第33-35页
   ·siRNA靶序列的设计第33页
   ·siRNA靶序列的制备第33-35页
 3 慢病毒载体第35-38页
   ·基于HIV-1的慢病毒载体第35页
   ·HIV-1的基本结构第35-36页
   ·基于HIV-1的慢病毒载体发展第36-38页
 4 慢病毒介导的RNAI在抗病毒方面的应用第38-43页
   ·艾滋病病毒第39-41页
   ·肝炎病毒第41页
   ·人乳头瘤病毒第41页
   ·柯萨奇病毒第41-42页
   ·乙型脑炎病毒第42页
   ·朊病毒第42-43页
 参考文献第43-52页
第三章 靶向PRRSV ORF1和ORF7shRNA重组慢病毒的构建及滴度测定第52-66页
 1 材料与方法第52-59页
   ·材料第52-53页
   ·方法第53-59页
 2 结果第59-62页
   ·慢病毒载体质粒pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen,包装质粒psPAX2,包膜质粒pMD2.G的酶切鉴定第59页
   ·PH1-shRNA表达框的扩增和重组慢病毒载体质粒的构建第59-61页
   ·慢病毒的包装第61页
   ·慢病毒滴度的测定第61-62页
   ·慢病毒感染Marc-145细胞第62页
 3 讨论第62-66页
第四章 靶向PRRSV ORF1 shRNA重组慢病毒的构建及滴度测定第66-76页
 1 材料与方法第66-70页
   ·材料第66-67页
   ·方法第67-70页
 2 结果第70-71页
   ·重组慢病毒载体质粒的鉴定第70-71页
   ·慢病毒的包装第71页
   ·慢病毒滴度测定第71页
 3 讨论第71-73页
 参考文献第73-76页
第五章 shRNA~(EGFP)-MARC-145细胞系的建立及其体外抑制PRRSV复制研究第76-88页
 1 材料与方法第76-80页
   ·材料第76-77页
   ·方法第77-80页
 2 结果第80-84页
   ·rLV-NP9感染Marc-145细胞第80-81页
   ·流式细胞仪筛选结果第81页
   ·筛选细胞的绿色荧光蛋白表达和细胞形态观察第81-82页
   ·PCR鉴定结果第82页
   ·质粒酶切鉴定并测序第82-83页
   ·细胞病变(CPE)与TCID_(50)测定结果第83-84页
   ·实时PCR结果第84页
 3 讨论第84-88页
全文总结第88-90页
致谢第90-92页
附录第92页

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