| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-37页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 | 第13-27页 |
| 1 病毒组成及分型 | 第13-14页 |
| 2 病毒基因组结构 | 第14页 |
| 3 病毒基因组编码的非结构蛋白 | 第14-15页 |
| 4 病毒基因组编码的结构蛋白 | 第15-17页 |
| 5 病毒的复制 | 第17-19页 |
| 6 PRRSV与免疫 | 第19-20页 |
| 7 小结 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-27页 |
| 第二章 单股正链RNA病毒3'UTR结构与功能研究进展 | 第27-37页 |
| 1 3’UTR常见结构元件 | 第28页 |
| 2 3’UTR结构与功能研究方法 | 第28-30页 |
| ·计算机方法预测RNA结构 | 第28-29页 |
| ·试验法测定RNA结构 | 第29-30页 |
| 3 3’UTR的功能及其与结构的关系 | 第30-33页 |
| ·3’UTR调控病毒RNA合成 | 第30-31页 |
| ·3’UTR调控病毒翻译 | 第31-32页 |
| ·3’UTR影响病毒的细胞致病变性及致病力 | 第32页 |
| ·3’UTR其它生物学功能 | 第32-33页 |
| 4 问题与小结 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-37页 |
| 第二篇 试验研究 | 第37-85页 |
| 第三章 PRRSV 3’UTR 5'端序列缺失对病毒复制的影响 | 第37-57页 |
| 1 材料和方法 | 第39-49页 |
| ·质粒和细胞 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·PRRSV 3’UTR缺失突变克隆的构建 | 第39-44页 |
| ·引物设计 | 第39-40页 |
| ·SOE-PCR(重叠延伸基因扩增技术) | 第40-42页 |
| ·Xba Ⅰ、XhoⅠ双酶切反应 | 第42-43页 |
| ·连接反应 | 第43页 |
| ·抽提质粒和鉴定 | 第43-44页 |
| ·QIAgen试剂盒抽提转染所用质粒 | 第44页 |
| ·BHK-21细胞转染 | 第44页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第44-45页 |
| ·基因组及负链基因组检测 | 第45-47页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第45页 |
| ·RT-PCR检测亚基因组 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR检测负链基因组 | 第46-47页 |
| ·转染上清盲传 | 第47页 |
| ·突变病毒的鉴定 | 第47-49页 |
| ·突变病毒上清的传代 | 第47页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR检测病毒基因组 | 第48-49页 |
| ·病毒生长特性研究 | 第49页 |
| ·病毒空斑形态分析 | 第49页 |
| ·病毒多步生长曲线的绘制 | 第49页 |
| ·APRRS和突变体3’UTR-二级结构预测分析 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-54页 |
| ·Ⅱ型PRRSV全长3’UTR 5'端缺失突变质粒构建结果 | 第49-50页 |
| ·间接免疫荧光结果 | 第50-51页 |
| ·基因组及负链基因组检测结果 | 第51-52页 |
| ·突变病毒的拯救和突变病毒基因组鉴定 | 第52页 |
| ·突变病毒生长特性分析 | 第52-53页 |
| ·空斑形态比较 | 第52-53页 |
| ·多步生长曲线的绘制 | 第53页 |
| ·突变体二级结构分析 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第四章 PRRSV 3’UTR保守二级结构元件的功能解析 | 第57-85页 |
| 1 材料与方法 | 第58-69页 |
| ·质粒和细胞 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| ·PRRSV 3’UTR序列和结构分析 | 第60页 |
| ·中间质粒pB3’UTR的构建 | 第60-61页 |
| ·Xba Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切 | 第60-61页 |
| ·连接反应 | 第61页 |
| ·抽提质粒和鉴定 | 第61页 |
| ·茎环结构突变质粒的构建 | 第61-64页 |
| ·引物设计 | 第61-62页 |
| ·点突变PCR | 第62-63页 |
| ·消化DNA模板 | 第63页 |
| ·抽提质粒和鉴定 | 第63页 |
| ·双酶切 | 第63-64页 |
| ·连接反应 | 第64页 |
| ·抽提质粒和鉴定 | 第64页 |
| ·突变体结构分析 | 第64页 |
| ·"A-CG"凸起结构(bulge"A-GC")突变质粒的构建 | 第64-67页 |
| ·引物设计 | 第64-65页 |
| ·点突变PCR | 第65页 |
| ·消化DNA模板 | 第65-66页 |
| ·抽提质粒和鉴定 | 第66页 |
| ·双酶切 | 第66页 |
| ·连接反应 | 第66页 |
| ·抽提质粒和鉴定 | 第66页 |
| ·突变体结构分析 | 第66-67页 |
| ·BHK-21细胞转染 | 第67页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第67页 |
| ·亚基因组及负链基因组检测 | 第67-68页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第67页 |
| ·RT-PCR检测亚基因组 | 第67-68页 |
| ·RT-PCR检测负链基因组 | 第68页 |
| ·转染上清盲传 | 第68页 |
| ·突变病毒的鉴定 | 第68-69页 |
| ·突变病毒上清的传代 | 第68页 |
| ·病毒RNA提取 | 第68页 |
| ·RT-PCR检测病毒基因组 | 第68-69页 |
| ·病毒生长特性研究 | 第69页 |
| ·病毒空斑形态分析 | 第69页 |
| ·病毒多步生长曲线的绘制 | 第69页 |
| 2 结果 | 第69-81页 |
| ·序列和结构分析结果 | 第69-71页 |
| ·茎环结构突变克隆的鉴定及结构分析 | 第71-72页 |
| ·"A-GC"凸起结构突变克隆的鉴定及结构分析 | 第72-74页 |
| ·间接免疫荧光结果 | 第74-75页 |
| ·基因组及负链基因组检测结果 | 第75-76页 |
| ·突变病毒的拯救和突变病毒的基因组鉴定 | 第76-78页 |
| ·突变病毒生长特性分析 | 第78-81页 |
| ·空斑形态比较 | 第78-79页 |
| ·多步生长曲线的绘制 | 第79-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 全文总结 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
