| 项目资助 | 第6-7页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第7-8页 |
| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略词 | 第15-17页 |
| 目录 | 第17-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-51页 |
| 1.1 耐辐射奇球菌的研究 | 第20-31页 |
| 1.1.1 耐辐射奇球菌的发现与命名 | 第20页 |
| 1.1.2 耐辐射奇球菌的形态特征及生长周期 | 第20-22页 |
| 1.1.3 耐辐射奇球菌的基因组组成 | 第22-24页 |
| 1.1.4 耐辐射奇球菌的DNA损伤抗性 | 第24-25页 |
| 1.1.5 耐辐射奇球菌细胞结构特征对抗性影响 | 第25-27页 |
| 1.1.6 耐辐射奇球菌功能蛋白对抗性的贡献 | 第27-28页 |
| 1.1.7 耐辐射奇球菌DNA损伤修复系统 | 第28-31页 |
| 1.2 耐辐射奇球菌PprI蛋白的研究进展 | 第31-41页 |
| 1.2.1 PprI蛋白的同源性及结构分析 | 第31-34页 |
| 1.2.2 PprI蛋白的功能分析 | 第34-39页 |
| 1.2.3 表达PprI蛋白在其它生物中的功能分析 | 第39-41页 |
| 1.3 参考文献 | 第41-51页 |
| 第二章 耐辐射奇球菌PprI蛋白的体内外蛋白酶活性研究 | 第51-61页 |
| 2.1 引言 | 第51-53页 |
| 2.2 材料与方法 | 第53-56页 |
| 2.2.1 菌种,质粒和培养基 | 第53页 |
| 2.2.2 仪器与试剂 | 第53-54页 |
| 2.2.3 蛋白表达质粒的构建 | 第54页 |
| 2.2.4 蛋白的诱导表达与纯化 | 第54-55页 |
| 2.2.5 PprI酶切活性检测 | 第55页 |
| 2.2.6 蛋白质的质谱鉴定 | 第55-56页 |
| 2.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 2.3.1 AKTA Purifier蛋白纯化 | 第56页 |
| 2.3.2 体外PprI蛋白酶活性分析 | 第56-57页 |
| 2.3.3 酶切产物的质谱鉴定 | 第57-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-60页 |
| 2.5 参考文献 | 第60-61页 |
| 第三章 PprI蛋白酶切位点与特异性识别序列的分析 | 第61-71页 |
| 3.1 引言 | 第61-62页 |
| 3.2 材料与方法 | 第62-63页 |
| 3.2.1 仪器与试剂 | 第62页 |
| 3.2.2 点突变表达质粒构建 | 第62页 |
| 3.2.3 多肽的C端测序 | 第62页 |
| 3.2.4 酶切特异性序列的分析 | 第62-63页 |
| 3.3 实验结果 | 第63-68页 |
| 3.3.1 点突变的鉴定 | 第63页 |
| 3.3.2 PprI蛋白酶切位点的确定 | 第63-64页 |
| 3.3.3 PprI蛋白酶切识别序列的鉴定 | 第64-66页 |
| 3.3.4 PprI蛋白酵的新颖性分析 | 第66-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-69页 |
| 3.5 参考文献 | 第69-71页 |
| 第四章 PprI蛋白酶活性的Mn(2+)依赖性分析 | 第71-82页 |
| 4.1 引言 | 第71-73页 |
| 4.2 材料与方法 | 第73-75页 |
| 4.2.1 仪器与试剂 | 第73页 |
| 4.2.2 微量透析装置的制作 | 第73页 |
| 4.2.3 蛋白样品的去金属离子 | 第73页 |
| 4.2.4 蛋白样品的金属离子处理 | 第73页 |
| 4.2.5 PprI蛋白酶活性的金属离子筛选 | 第73-74页 |
| 4.2.6 PprI蛋白酶的HEXXE位点分析 | 第74-75页 |
| 4.3 实验结果 | 第75-77页 |
| 4.3.1 PprI酶切活性需要Mn(2+)的激活 | 第75页 |
| 4.3.2 PprI蛋白酶的HEXXE位点功能鉴定 | 第75-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-79页 |
| 4.5 参考文献 | 第79-82页 |
| 第五章 在体内外DdrO蛋白特异性地结合基因启动子分析 | 第82-95页 |
| 5.1 引言 | 第82-84页 |
| 5.2 材料与方法 | 第84-86页 |
| 5.2.1 仪器与试剂 | 第84页 |
| 5.2.2 凝胶迁移实验(EMSA) | 第84页 |
| 5.2.3 抗原亲和纯化抗体 | 第84-85页 |
| 5.2.4 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第85-86页 |
| 5.3 实验结果 | 第86-90页 |
| 5.3.1 在体外DdrO蛋白可以结合DDR基因的启动子检测 | 第86-87页 |
| 5.3.2 在体内DdrO蛋白可以结合DDR基因启动子鉴定 | 第87-88页 |
| 5.3.3 RDRM位点是DdrO蛋白结合DDR基因启动子所必需的 | 第88页 |
| 5.3.4 RDRM位点是DdrO结合DDR基因启动子的位置所在 | 第88-90页 |
| 5.4 讨论 | 第90-92页 |
| 5.5 参考文献 | 第92-95页 |
| 第六章 在体内外PprI与DdrO-DNA复合物的生化分析 | 第95-105页 |
| 6.1 引言 | 第95-96页 |
| 6.2 材料与方法 | 第96-98页 |
| 6.2.1 仪器与试剂 | 第96页 |
| 6.2.2 辐照样品的时间跟踪处理 | 第96页 |
| 6.2.3 DNA-DdrO复合物对PprI蛋白酶的酶切效率检测 | 第96页 |
| 6.2.4 PprI蛋白酶对DNA-DdrO复合物的EMSA检测 | 第96-97页 |
| 6.2.5 辐照样品的制样 | 第97页 |
| 6.2.6 Western blotting | 第97-98页 |
| 6.3 实验结果 | 第98-102页 |
| 6.3.1 在体外PprI蛋白酶切产物的Western blotting分析 | 第98页 |
| 6.3.2 PprI蛋白酶对DNA-DdrO复合物的迁移率影响 | 第98-99页 |
| 6.3.3 DNA-DdrO复合物对PprI蛋白酶的酶切效率影响 | 第99-100页 |
| 6.3.4 体内PprI蛋白在辐照后酶切DdrO蛋白分析 | 第100-102页 |
| 6.4 讨论 | 第102-104页 |
| 6.5 参考文献 | 第104-105页 |
| 第七章 DNA-DdrO-PprI介导的调控通路分析 | 第105-120页 |
| 7.1 引言 | 第105-107页 |
| 7.2 材料与方法 | 第107-110页 |
| 7.2.1 仪器与试剂 | 第107页 |
| 7.2.2 辐照样品的时间跟踪处理 | 第107页 |
| 7.2.3 耐辐射奇球菌RNA提取 | 第107页 |
| 7.2.4 cDNA合成 | 第107-108页 |
| 7.2.5 实时荧光定量PCR检测 | 第108页 |
| 7.2.6 耐辐射奇球菌ddrO突变体的构建 | 第108-109页 |
| 7.2.7 在γ辐照,紫外线辐照与过氧化氢等处理条件下生存率检测 | 第109-110页 |
| 7.3 实验结果 | 第110-116页 |
| 7.3.1 ddrO突变体鉴定 | 第110-111页 |
| 7.3.2 生存率曲线的分析 | 第111-112页 |
| 7.3.3 在辐照后突变体R109E体内DdrO蛋白分析 | 第112-113页 |
| 7.3.4 在体内DdrO蛋白抑制DDR基因转录分析 | 第113-114页 |
| 7.3.5 DNA-DdrO-PprI介导的DNA损伤应激响应模型 | 第114-116页 |
| 7.4 讨论 | 第116-118页 |
| 7.5 参考文献 | 第118-120页 |
| 第八章 总结与展望 | 第120-124页 |
| 参考文献 | 第124页 |
