| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 菠萝生产概况和存在的主要问题 | 第12-13页 |
| 1.1.1 菠萝生产概况 | 第12页 |
| 1.1.2 菠萝生产中存在的主要问题 | 第12-13页 |
| 1.2 菠萝花期调控技术和转基因研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1 乙烯诱导菠萝开花的研究进展 | 第13页 |
| 1.2.2 菠萝转基因研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 粉菠萝研究概况 | 第14-15页 |
| 1.4 植物开花调控机理 | 第15-17页 |
| 1.4.1 植物开花主要调控途径 | 第15-16页 |
| 1.4.1.1 光周期途径 | 第15-16页 |
| 1.4.1.2 春化作用途径 | 第16页 |
| 1.4.1.3 GA途径 | 第16页 |
| 1.4.1.4 自主途径 | 第16页 |
| 1.4.2 开花途径中的表观调控 | 第16-17页 |
| 1.5 表观遗传学概述 | 第17页 |
| 1.6 表观遗传调控的物质基础 | 第17-18页 |
| 1.7 组蛋白乙酰化研究进展 | 第18-20页 |
| 1.7.1 组蛋白乙酰化位点 | 第18页 |
| 1.7.2 组蛋白乙酰化的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.7.3 组蛋白乙酰转移酶 | 第19页 |
| 1.7.3.1 组蛋白乙酰转移酶的分类 | 第19页 |
| 1.7.3.2 主要的组蛋白乙酰转移酶以及作用方式 | 第19页 |
| 1.7.4 组蛋白去乙酰化酶 | 第19-20页 |
| 1.7.4.1 组蛋白去乙酰化酶的分类 | 第19页 |
| 1.7.4.2 主要的组蛋白去乙酰化酶以及作用方式 | 第19-20页 |
| 1.8 DNA甲基化研究进展 | 第20-22页 |
| 1.8.1 DNA甲基化概述 | 第20-21页 |
| 1.8.2 DNA甲基化的发生机制 | 第21页 |
| 1.8.3 DNA甲基化水平检测方法 | 第21-22页 |
| 1.8.3.1 高效液相色谱法 | 第21页 |
| 1.8.3.2 重亚硫酸和氯乙醛处理法 | 第21-22页 |
| 1.8.3.3 免疫反应法 | 第22页 |
| 1.8.3.4 MSAP法 | 第22页 |
| 1.9 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 1.10 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 粉菠萝FLD、FVE和HD1同源基因的克隆与时空表达分析 | 第25-53页 |
| 2.1 材料、试剂、仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.1 实验材料及处理方法 | 第26页 |
| 2.1.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.1.2 处理方法 | 第26页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 粉菠萝总RNA提取与纯化 | 第27-29页 |
| 2.2.1.1 总RNA的提取(改进CTAB法) | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 总RNA的提取(AxyPrep试剂盒法) | 第28页 |
| 2.2.1.3 RNA的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.2 RNA质量检测 | 第29页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| 2.2.4 引物的合成 | 第29-31页 |
| 2.2.4.1 RACE引物设计 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 Real-timePCR引物设计 | 第30-31页 |
| 2.2.5 RACE技术扩增凤梨FLD、FVE和HD1基因cDNA5’和3’端 | 第31页 |
| 2.2.5.1 RACE cDNA模版的合成 | 第31页 |
| 2.2.5.2 mRNA3’和5’端片段的获得 | 第31页 |
| 2.2.6 目的片段回收 | 第31-32页 |
| 2.2.7 克隆目的片段回收 | 第32页 |
| 2.2.8 大肠杆菌DH5α感受态制备 | 第32-33页 |
| 2.2.9 连接转化及阳性菌PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.9.1 PCR产物的连接与转化反应 | 第33页 |
| 2.2.9.2 重组子的筛选及菌液PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.10 相关基因的序列测定和基因生物信息学分析 | 第34页 |
| 2.2.11 荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 2.2.11.1 荧光定量cDNA模版和引物的质量检验 | 第34页 |
| 2.2.11.2 荧光定量PCR的反应体系和反应程序 | 第34-35页 |
| 2.2.11.3 荧光定量PCR的数据处理方法 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-50页 |
| 2.3.1 RNA质量的检测 | 第35页 |
| 2.3.2 粉菠萝FLD、FVE和HD1基因的全长的克隆 | 第35-37页 |
| 2.3.2.1 FLD基因的全长的克隆 | 第35-36页 |
| 2.3.2.2 FVE基因的全长的克隆 | 第36页 |
| 2.3.2.3 HD1基因的全长的克隆 | 第36-37页 |
| 2.3.3 粉菠萝FLD、FVE和HD1基因编码蛋白预测与结构域分析 | 第37-39页 |
| 2.3.3.1 FLD基因阅读框和序列理化性质分析 | 第37页 |
| 2.3.3.2 FLD保守结构域分析 | 第37-38页 |
| 2.3.3.3 FVE基因阅读框和序列理化性质分析 | 第38页 |
| 2.3.3.4 FVE保守结构域分析 | 第38页 |
| 2.3.3.5 HD1基因阅读框和序列理化性质分析 | 第38-39页 |
| 2.3.3.6 HD1保守结构域分析 | 第39页 |
| 2.3.4 粉菠萝FLD、FVE和HD1蛋白同源性基因家族系统进化树分析 | 第39-45页 |
| 2.3.4.1 FLD蛋白同源性比较及基因家族系统进化树分析 | 第39-41页 |
| 2.3.4.2 FVE同源性比较及基因家族系统进化树分析 | 第41-43页 |
| 2.3.4.3 HD1同源性比较及基因家族系统进化树分析 | 第43-45页 |
| 2.3.5 荧光定量PCR的cDNA模板和引物质量检验 | 第45-46页 |
| 2.3.6 荧光定量PCR溶解曲线的建立与分析 | 第46-47页 |
| 2.3.7 FLD、FVE和HD1基因表达分析 | 第47-50页 |
| 2.3.7.1 FLD基因表达分析 | 第47-48页 |
| 2.3.7.2 FVE基因表达分析 | 第48-49页 |
| 2.3.7.3 HD1基因表达分析 | 第49-50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-53页 |
| 2.4.1 FLD、FVE和HD1基因分析 | 第50-51页 |
| 2.4.2 FLD、FVE和HD1基因的荧光定量表达分析 | 第51-53页 |
| 第三章 粉菠萝MSAP甲基化水平分析 | 第53-70页 |
| 3.1 实验材料与主要试剂 | 第53-54页 |
| 3.1.1 实验材料及处理方法 | 第53页 |
| 3.1.2 实验药品与试剂 | 第53-54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-59页 |
| 3.2.1 DNA的提取 | 第54页 |
| 3.2.2 DNA质量检测 | 第54页 |
| 3.2.3 MSAP引物及接头序列 | 第54-55页 |
| 3.2.4 MSAP引物接头的制备 | 第55-56页 |
| 3.2.5 MSAP步骤 | 第56-57页 |
| 3.2.5.1 双酶切 | 第56页 |
| 3.2.5.2 连接体系 | 第56页 |
| 3.2.5.3 MSAP预扩增反应 | 第56-57页 |
| 3.2.5.4 MSAP选择性扩增 | 第57页 |
| 3.2.6 MSAP选择性扩增电泳检测 | 第57-58页 |
| 3.2.7 甲基化修饰位点回收、克隆和测序 | 第58-59页 |
| 3.2.7.1 目的片段回收 | 第58页 |
| 3.2.7.2 回收片段的克隆 | 第58-59页 |
| 3.2.7.3 测序及序列分析 | 第59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 3.3.1 粉菠萝基因组DNA提取结果分析 | 第60页 |
| 3.3.2 MSAP预扩增结果分析 | 第60-61页 |
| 3.3.3 乙烯处理不同时间粉菠萝DNA甲基化水平分析 | 第61-62页 |
| 3.3.4 乙烯处理引起的甲基化状态变化的分析 | 第62-64页 |
| 3.3.5 乙烯处理不同时间粉菠萝DNA甲基化模式变异分析 | 第64-66页 |
| 3.3.6 MSAP多态性片段的序列分析 | 第66-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-70页 |
| 3.4.1 乙烯处理对粉菠萝甲基化水平的影响 | 第67-68页 |
| 3.4.2 DNA甲基化差异片段回收的相关功能基因 | 第68-70页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第70-72页 |
| 4.1 讨论 | 第70页 |
| 4.2 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
