| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 第一章 猪瘟病毒及其与猪 Jiv 蛋白作用研究进展 | 第12-18页 |
| ·CSFV 的研究进展 | 第12-16页 |
| ·CSFV 的形态及特征 | 第12-13页 |
| ·CSFV 的增殖 | 第13页 |
| ·CSFV 基因组结构及蛋白功能 | 第13-16页 |
| ·分子伴侣 Jiv 的发现 | 第16页 |
| ·分子伴侣的简介 | 第16页 |
| ·分子伴侣 Jiv 的发现 | 第16页 |
| ·CSFV 与分子伴侣 Jiv 的相互作用 | 第16-18页 |
| 第二章 RNA 干扰技术研究进展 | 第18-21页 |
| ·RNA 干扰的作用机制 | 第18-19页 |
| ·转录水平的基因沉默 | 第18页 |
| ·转录后水平的基因沉默 | 第18页 |
| ·microRNA 介导的翻译水平基因沉默 | 第18-19页 |
| ·siRAN 的制备方法 | 第19页 |
| ·RNA 干扰在抗 CSFV 中应用 | 第19-21页 |
| 试验研究 | 第21-52页 |
| 第三章 猪瘟病毒 TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法的建立 | 第21-31页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·病毒、质粒和菌种 | 第21页 |
| ·试剂配制 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-24页 |
| ·引物和探针的设计及合成 | 第22页 |
| ·标准品的制备 | 第22-23页 |
| ·实时荧光定量 PCR 方法的建立 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量 PCR 方法与常规 PCR 方法的比较 | 第24页 |
| ·临床样品的检测 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-29页 |
| ·目的片段的扩增及鉴定 | 第24-25页 |
| ·退火温度与引物和探针浓度的确定 | 第25页 |
| ·敏感性试验和标准曲线 | 第25-26页 |
| ·特异性试验 | 第26页 |
| ·重复性试验 | 第26-27页 |
| ·实时荧光定量 PCR 与常规 PCR 敏感性的比较 | 第27-28页 |
| ·临床样品的检测结果 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第四章 转录靶向 Jiv 基因 shRNAPK-15 细胞株的建立及病毒干扰效果初步研究 | 第31-44页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·材料和试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| ·试剂的配制 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-36页 |
| ·靶向 Jiv 基因 RNA 干扰载体的设计 | 第32页 |
| ·慢病毒载体病毒滴度的复核 | 第32-33页 |
| ·转录靶向 Jiv 基因 shRNA 干扰片段 PK-15 细胞株的建立 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测阳性细胞 Jiv mRNA 的表达 | 第34-35页 |
| ·阳性细胞抑制猪瘟病毒增殖作用的分析 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-42页 |
| ·慢病毒载体转染 PK-15 细胞 | 第36页 |
| ·阳性 PK-15 细胞的筛选 | 第36-37页 |
| ·阳性细胞的鉴定 | 第37-38页 |
| ·阳性细胞中 Jiv 基因 mRNA 的相对定量结果 | 第38-40页 |
| ·阳性细胞干扰猪瘟病毒效果的检测 | 第40-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第五章 转录靶向 Jiv 基因 shRNA 猪胎儿成纤维细胞的建立及鉴定 | 第44-52页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·试验用动物 | 第44页 |
| ·仪器设备 | 第44页 |
| ·试验耗材 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·试剂配制 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·胎猪成纤维细胞的分离培养 | 第45-46页 |
| ·细胞生长曲线测定 | 第46页 |
| ·转录靶向 Jiv 基因 shRNA 干扰片段猪胎儿成纤维细胞株的建立 | 第46页 |
| ·阳性细胞的鉴定 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-50页 |
| ·胎猪成纤维细胞的分离培养 | 第47-48页 |
| ·胎猪成纤维细胞生长曲线的测定 | 第48页 |
| ·慢病毒干扰载体 P2 侵染胎猪成纤维细胞及阳性细胞的筛选结果 | 第48-49页 |
| ·阳性细胞的鉴定 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
