| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 英文缩写符号 | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-12页 |
| 1.1 引言 | 第9-10页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第10页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第10-11页 |
| 1.4 研究方案 | 第11-12页 |
| 第二章 17β-羟基类固醇脱氢酶的基因克隆及表达载体构建 | 第12-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第12-15页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第12页 |
| 2.1.2 仪器与药品 | 第12-13页 |
| 2.1.3 试剂及溶液 | 第13-15页 |
| 2.2 实验内容 | 第15-21页 |
| 2.2.1 ATCC11996总DNA的提取 | 第15页 |
| 2.2.2 引物设计及合成 | 第15页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆 | 第15-16页 |
| 2.2.3.1 PCR 反应体系及扩增条件 | 第15-16页 |
| 2.2.3.2 目的片段的鉴定 | 第16页 |
| 2.2.4 重组质粒pUcM-T-17β-HSDX的构建 | 第16-18页 |
| 2.2.4.1 目的基因 17β-HSDX与pUcM-T的连接 | 第16-17页 |
| 2.2.4.2 转化 | 第17-18页 |
| 2.2.5 质粒鉴定 | 第18-19页 |
| 2.2.6 表达载体的构建 | 第19-21页 |
| 2.3 结果 | 第21-25页 |
| 2.3.1 目的基因的获取 | 第21页 |
| 2.3.2 连接pUCm-T载体鉴定 | 第21-25页 |
| 2.4 结果讨论 | 第25-26页 |
| 2.5 小结 | 第26-27页 |
| 第三章 重组 17β-HSDX的表达及纯化 | 第27-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 仪器与药品 | 第27页 |
| 3.1.2 试剂及培养基 | 第27-28页 |
| 3.2 实验内容 | 第28-30页 |
| 3.2.1 重组质粒pET-15b-17β-HSDX转化入大肠杆菌BL21 | 第28页 |
| 3.2.2 筛选阳性克隆子 | 第28页 |
| 3.2.3 诱导表达重组载体pET-15b-17β-HSDX | 第28-29页 |
| 3.2.4 17β-HSDX蛋白的分离纯化 | 第29-30页 |
| 3.2.5 17β-HSDX含量测定 | 第30页 |
| 3.3 试验结果 | 第30-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33页 |
| 3.5 小结 | 第33-34页 |
| 第四章 17β-HSDX多抗制备及效价测定 | 第34-41页 |
| 4.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 4.1.1 试剂及仪器 | 第34页 |
| 4.1.2 溶液及培养基 | 第34-36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 4.2.1 制备 17β-HSDX多克隆抗体 | 第36页 |
| 4.2.2 抗体效价测定 | 第36-37页 |
| 4.2.3 17β-HSDX的ELISA标准曲线建立 | 第37页 |
| 4.2.4 C.testosteroni中 17β-HSDX在甾体激素诱导下的ELSIA测定 | 第37-38页 |
| 4.3 实验结果 | 第38-40页 |
| 4.3.1 测定兔血清效价 | 第38页 |
| 4.3.2 ELISA标准曲线的建立 | 第38-39页 |
| 4.3.3 样品中蛋白浓度测定 | 第39页 |
| 4.3.4 样品中 17β-HSDX表达量的测定 | 第39-40页 |
| 4.4 结果讨论 | 第40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 第五章 构建 17β-HSDX敲除菌株并研究其生理活性 | 第41-59页 |
| 5.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 5.1.1 菌株来源 | 第42页 |
| 5.1.2 试剂和仪器 | 第42页 |
| 5.1.3 培养基及试剂配置 | 第42-43页 |
| 5.2 实验方法 | 第43-50页 |
| 5.2.1 克隆 17β-HSDX基因片段 | 第43-45页 |
| 5.2.2 pCR2.1-M17β-HSDX载体构建 | 第45-46页 |
| 5.2.3 构建 17β-HSDX变异菌株并筛选 | 第46-49页 |
| 5.2.4 17β-HSDX降解激素的功能表征 | 第49-50页 |
| 5.3 实验结果 | 第50-58页 |
| 5.3.1 获取和鉴定M17β-HSDX目的片段 | 第50-52页 |
| 5.3.2 pCR2.1-M17β-HSDX电转化质粒的构建 | 第52-54页 |
| 5.3.3 MC.testosteroni ATCC11996（M-CT）的筛选鉴定 | 第54-55页 |
| 5.3.4 17β-HSDX基因在C.testosteroni ATCC11996中功能研究 | 第55-58页 |
| 5.4 结果讨论 | 第58页 |
| 5.5 小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 附录 | 第64页 |
