| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 中英文缩略语表（Abbreviation） | 第11-12页 |
| 第一章JEV文献综述 | 第12-24页 |
| 1. 乙型脑炎的流行病学 | 第12-14页 |
| 1.1 乙脑的流行特征 | 第12-13页 |
| 1.2 乙脑的传播媒介与易感群体 | 第13-14页 |
| 2. 乙型脑炎病毒的生物学特性 | 第14-19页 |
| 2.1 乙型脑炎病毒的病原性 | 第14-15页 |
| 2.2 乙型脑炎病毒的生物学特性 | 第15-16页 |
| 2.3 乙型脑炎病毒的结构蛋白 | 第16页 |
| 2.4 乙型脑炎病毒的非结构蛋白 | 第16-17页 |
| 2.5 乙型脑炎病毒的理化特性 | 第17-18页 |
| 2.6 乙型脑炎病毒的增殖特性 | 第18页 |
| 2.7 乙型脑炎病毒的复制过程 | 第18-19页 |
| 3. 乙型脑炎病毒的入侵和致病机理 | 第19-20页 |
| 4. 乙型脑炎的临床表现 | 第20页 |
| 5. 乙型脑炎的病理变化 | 第20-21页 |
| 6. 乙型脑炎的诊断 | 第21-22页 |
| 6.1 血清学检测 | 第21页 |
| 6.2 病毒分离培养 | 第21页 |
| 6.3 分子生物学检测 | 第21-22页 |
| 7. 乙型脑炎的防治及疫苗研究现状 | 第22-24页 |
| 7.1 灭活疫苗 | 第22-23页 |
| 7.2 减毒活疫苗 | 第23-24页 |
| 第二章JEV M蛋白单克隆抗体的制备及特性分析 | 第24-58页 |
| 1．前言 | 第24-26页 |
| 1.1 单克隆抗体的原理 | 第24-25页 |
| 1.2 单克隆抗体的应用及发展 | 第25-26页 |
| 2．研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 3. 材料与方法 | 第27-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 3.1.1 质粒、菌株、病毒、细胞和动物 | 第27-28页 |
| 3.1.2 主要试剂、仪器和耗材 | 第28页 |
| 3.1.3 抗生素及其配制方法 | 第28-29页 |
| 3.1.4 主要培养基及其配制 | 第29页 |
| 3.1.5 主要缓冲液（溶液）及其配制 | 第29-31页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第31-43页 |
| 3.2.1 M蛋白引物的设计 | 第31页 |
| 3.2.2 M蛋白基因的扩增 | 第31页 |
| 3.2.3 M蛋白基因片段的纯化回收 | 第31-32页 |
| 3.2.4 PCR回收产物及表达载体的处理 | 第32页 |
| 3.2.5 目的基因与载体的连接 | 第32页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第32页 |
| 3.2.7 重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.8 重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| 3.2.9 重组质粒p28a-sumo-M的诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.2.10 表达产物p28a-sumo-M的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| 3.2.11 表达产物p28a-sumo-M的Western Blot分析 | 第34-35页 |
| 3.2.12 不溶性包涵体蛋白纯化方法 | 第35-36页 |
| 3.2.13 动物免疫 | 第36页 |
| 3.2.14 间接ELISA检测方法的建立 | 第36-37页 |
| 3.2.15 间接ELISA法检测小鼠的免疫效价 | 第37页 |
| 3.2.16 SP2/0 骨髓瘤细胞的制备 | 第37页 |
| 3.2.17 免疫脾细胞的制备 | 第37-38页 |
| 3.2.18 饲养细胞的制备 | 第38页 |
| 3.2.19 细胞融合 | 第38-39页 |
| 3.2.20 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第39页 |
| 3.2.21 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第39页 |
| 3.2.22 杂交瘤细胞的染色体计数 | 第39-40页 |
| 3.2.23 单抗腹水的制备及抗体效价的测定 | 第40页 |
| 3.2.24 单克隆抗体的纯化 | 第40页 |
| 3.2.25 单克隆抗体蛋白质含量的测定 | 第40-41页 |
| 3.2.26 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第41页 |
| 3.2.27 单克隆抗体的IFA分析 | 第41页 |
| 3.2.28 单克隆抗体的Western Blot分析 | 第41页 |
| 3.2.29 单克隆抗体靶抗原表位区域的分析 | 第41-42页 |
| 3.2.30 小片段的原核表达 | 第42页 |
| 3.2.31 单克隆抗体靶抗原表位的粗步判定 | 第42-43页 |
| 4．结果与分析 | 第43-55页 |
| 4.1 结果 | 第43-55页 |
| 4.1.1 M基因片段PCR扩增及克隆质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| 4.1.2 p28a-sumo-M重组蛋白的表达及纯化 | 第44-47页 |
| 4.1.3 M蛋白最佳抗原包被浓度的测定 | 第47-48页 |
| 4.1.4 小鼠免疫效价的检测 | 第48页 |
| 4.1.5 杂交瘤细胞的筛选 | 第48页 |
| 4.1.6 杂交瘤细胞遗传性的稳定分析 | 第48-49页 |
| 4.1.7 单克隆抗体效价的检测 | 第49-50页 |
| 4.1.8 单克隆抗体亚型的检测 | 第50页 |
| 4.1.9 单克隆抗体的IFA分析 | 第50-51页 |
| 4.1.10 单克隆抗体的Western Blot分析 | 第51-52页 |
| 4.1.11 单克隆抗体靶抗原表位区域的分析 | 第52-53页 |
| 4.1.12 小片段的原核表达分析 | 第53-54页 |
| 4.1.13 M蛋白抗原表位的区域分析 | 第54-55页 |
| 5. 讨论与结论 | 第55-58页 |
| 5.1 讨论 | 第55-57页 |
| 5.1.1 单抗的应用前景 | 第55页 |
| 5.1.2 蛋白表达 | 第55-56页 |
| 5.1.3 动物免疫 | 第56页 |
| 5.1.4 细胞融合 | 第56页 |
| 5.1.5 单克隆抗体的筛选 | 第56-57页 |
| 5.1.6 M蛋白靶抗原的鉴定 | 第57页 |
| 5.2 小结 | 第57-58页 |
| 第三章 基于iTRAQ技术研究JEV P3 株感染U251 细胞的蛋白表达差异 | 第58-72页 |
| 1. 前言 | 第58-60页 |
| 2. 研究目的与意义 | 第60-61页 |
| 3. 实验材料与方法 | 第61-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第61页 |
| 3.2 实验方法 | 第61-66页 |
| 3.2.1 U251 细胞的复苏 | 第61页 |
| 3.2.2 病毒感染 | 第61页 |
| 3.2.3 iTRAQ技术分析细胞样品 | 第61-62页 |
| 3.2.4 荧光定量引物的设计 | 第62-64页 |
| 3.2.5 病毒总RNA的提取 | 第64页 |
| 3.2.6 RT-PCR | 第64页 |
| 3.2.7 转录水平蛋白表达差异分析 | 第64-65页 |
| 3.2.8 基因表达数据分析 | 第65-66页 |
| 4. 实验结果与分析 | 第66-71页 |
| 4.1 实验结果 | 第66-71页 |
| 4.1.1 蛋白质的鉴定 | 第66页 |
| 4.1.2 GO分析 | 第66-68页 |
| 4.1.3 差异蛋白定量信息的统计 | 第68-70页 |
| 4.1.4 荧光定量分析差异蛋白质的mRNA水平 | 第70-71页 |
| 5. 讨论与结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
