| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·植原体的研究现状 | 第11-17页 |
| ·菌原体的分类研究与植原体的发现 | 第11页 |
| ·植原体的分类 | 第11-12页 |
| ·植原体的生物学特性 | 第12页 |
| ·植原体的危害 | 第12-13页 |
| ·植原体的致病机制和传播途径 | 第13-14页 |
| ·植原体在寄主体内的分布和含量变化 | 第14页 |
| ·植原体的检测方法 | 第14-16页 |
| ·植原体的防治 | 第16-17页 |
| ·植原体相关膜蛋白的研究 | 第17-20页 |
| ·免疫膜蛋白 | 第17-19页 |
| ·Sec 蛋白 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 桑树萎缩植原体SecE 基因的序列分析与结构预测 | 第21-34页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·带病样叶 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·主要溶液配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·桑树总DNA 的提取 | 第23页 |
| ·SecE 基因PCR 扩增 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·目的片段克隆 | 第24-26页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-33页 |
| ·SecE 基因PCR 扩增结果 | 第26-27页 |
| ·重组质粒PCR 和双酶切鉴定结果 | 第27-28页 |
| ·目的片段的序列测定和同源性分析 | 第28-29页 |
| ·SecE 基因的生物信息学分析 | 第29-33页 |
| ·讨论 | 第33页 |
| ·Sec 分泌蛋白转运系统亚基基因扩增 | 第33页 |
| ·pMD19-T 载体的选择 | 第33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 SecE 基因的体外表达和SecA 基因表达载体的构建 | 第34-45页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·实验溶液配制 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·构建pET28-SecE 表达载体 | 第36-38页 |
| ·重组质粒pET28a-SecA 的构建 | 第38-39页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第40-41页 |
| ·SecE 基因在大肠杆菌中的表达 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-43页 |
| ·转化子快速鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·重组质粒鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第43页 |
| ·SecE 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 SecA 工程菌发酵条件优化及亲和层析纯化初探 | 第45-57页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·实验溶液配制 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·SecA 基因的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·工程菌E.coli BL21(pET28a-SecA)培养条件优化 | 第47页 |
| ·工程菌E.coli BL21(pET-28a-SecA)诱导条件优化 | 第47-48页 |
| ·细菌裂解获得可溶蛋白 | 第48-49页 |
| ·亲和层析纯化融合蛋白 | 第49-50页 |
| ·蛋白质含量的测定方法 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白浓度的确定 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-56页 |
| ·SecA 的表达鉴定 | 第51页 |
| ·工程菌E.coli BL21（pET28a-SecA）培养条件优化结果 | 第51-53页 |
| ·工程菌E.coli BL21（pET28a-SecA）诱导条件优化结果 | 第53-55页 |
| ·亲和层析纯化SecA 蛋白结果 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 结论与展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第68页 |
