| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1.1 杆状病毒的研究概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 杆状病毒的分类与生活史 | 第12-14页 |
| 1.1.2 杆状病毒基因组的结构和功能研究 | 第14-16页 |
| 1.1.3 杆状病毒的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 模式杆状病毒的介绍 | 第17-20页 |
| 1.2.1 苜蓿银纹夜蛾和型多角体病（AcMNPV） | 第17-18页 |
| 1.2.2 家蚕核型多角体病毒（BmNPV） | 第18-19页 |
| 1.2.3 核型多角体病毒DNA聚合酶 | 第19-20页 |
| 1.3 PCNA的概述 | 第20-26页 |
| 1.3.1 真核生物PCNA的简介 | 第20页 |
| 1.3.2 真核生物PCNA的形态结构与功能 | 第20-21页 |
| 1.3.3 PCNA在真核生物“细胞事件”中的功能 | 第21-25页 |
| 1.3.4 杆状病毒的PCNA | 第25-26页 |
| 1.4 标签蛋白融合技术 | 第26-27页 |
| 1.5 立题依据 | 第27-28页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 第二章 材料和方法 | 第29-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-35页 |
| 2.1.1 菌种及载体质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 昆虫细胞系及病毒 | 第29页 |
| 2.1.3 培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.4 常用材料及主要试剂 | 第30-35页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第35-37页 |
| 第三章 杆状病毒AcPCNA蛋白氨基酸序列的生物信息学分析 | 第37-41页 |
| 3.1 应用软件及分析方法 | 第37-38页 |
| 3.1.1 分析软件应用 | 第37页 |
| 3.1.2 分析方法-系统进化树分析 | 第37-38页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第38-40页 |
| 3.2.1 PCNA的序列分析 | 第38页 |
| 3.2.2 进化树分析 | 第38-40页 |
| 3.3 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 AcPCNA在原核细胞内表达及纯化 | 第41-56页 |
| 4.1 方法 | 第41-48页 |
| 4.1.1 CaCl_2法制备大肠杆菌DH5α及BL21感受态细胞 | 第41页 |
| 4.1.2 原核表达载体pET30a-AcPCNA的构建 | 第41-44页 |
| 4.1.3 碱裂解法小量质粒抽提 | 第44-45页 |
| 4.1.4 重组pET30a-Ac PCNA转化BL21表达菌 | 第45页 |
| 4.1.5 His-AcPCNA重组蛋白的原核诱导表达及纯化 | 第45-48页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第48-55页 |
| 4.2.1 目的基因片段的扩增 | 第48-49页 |
| 4.2.2 AcPCNA原核表达载体重组质粒的构建与鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.3 目的蛋白AcPCNA表达、鉴定及纯化 | 第50-55页 |
| 4.3 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 AcPCNA对Bm NPV-POL的影响 | 第56-67页 |
| 5.1 方法 | 第56-61页 |
| 5.1.1 重组Bacmid的构建 | 第56-58页 |
| 5.1.2 Sf-9 昆虫细胞培养（摇培） | 第58-59页 |
| 5.1.3 脂质体包埋法重组病毒质粒转染（参照invitrogen Bac to Bac表达系统） | 第59页 |
| 5.1.4 病毒感染Sf-9 细胞 | 第59页 |
| 5.1.5 His-AcPCNA在Sf-9 细胞中的表达及纯化 | 第59-60页 |
| 5.1.6 His-AcPCNA对BmNPV-POL活性影响检测 | 第60-61页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第61-65页 |
| 5.2.1 重组质粒pFastBacHTb-AcPCNA的构建与鉴定 | 第61-62页 |
| 5.2.2 重组AcPCNA病毒的制备与鉴定 | 第62-63页 |
| 5.2.3 目的蛋白AcPCNA的纯化 | 第63-64页 |
| 5.2.4 His-AcPCNA对BmNPV-POL的活性影响分析 | 第64-65页 |
| 5.3 小结 | 第65-67页 |
| 第六章 AcPCNA互作蛋白的查找 | 第67-75页 |
| 6.1 方法 | 第67-69页 |
| 6.1.1 His-AcPCNA的浓缩 | 第67页 |
| 6.1.2 His-AcPCNA-CNBr-activated Sepharose 4B耦联亲和层析柱的制备 | 第67-68页 |
| 6.1.3 AcMNPV感染Sf-9 细胞后总蛋白的提取 | 第68页 |
| 6.1.4 总蛋白过亲和层析柱获取AcPCNA互作蛋白 | 第68-69页 |
| 6.1.5 AcPCNA互作蛋白的鉴定 | 第69页 |
| 6.2 结果与讨论 | 第69-73页 |
| 6.2.1 His-AcPCNA的浓度测定 | 第69-70页 |
| 6.2.2 AcPCNA亲和层析柱的制备 | 第70页 |
| 6.2.3 AcPCNA互作蛋白的捕获与鉴定 | 第70-73页 |
| 6.3 小结 | 第73-75页 |
| 第七章 Bm NPV-POL纯化方法的改进 | 第75-84页 |
| 7.1 方法 | 第75-77页 |
| 7.1.1 pFastBacHTc-BmNPV-POL-Strep的重组构建 | 第75页 |
| 7.1.2 重组BmNPV-POL-Strep病毒的构建 | 第75-76页 |
| 7.1.3 重组BmNPV-POL-Strep蛋白在Sf-9 细胞中的表达 | 第76页 |
| 7.1.4 重组BmNPV-POL-Strep蛋白的纯化 | 第76页 |
| 7.1.5 Western Blot检测目的蛋白 | 第76-77页 |
| 7.1.6 BmNPV-POL的活性分析 | 第77页 |
| 7.2 结果与讨论 | 第77-82页 |
| 7.2.1 BmNPV-POL-Strep重组蛋白的构建 | 第77-78页 |
| 7.2.2 Strep标签融合蛋白BmNPV-POL的表达与纯化 | 第78-81页 |
| 7.2.3 BmNPV-POL的酶活性分析 | 第81-82页 |
| 7.3 小结 | 第82-84页 |
| 总结与展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 硕士期间学术研究成果 | 第92页 |
