| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 花鲈简介 | 第12页 |
| 1.2 鱼类非特异性免疫 | 第12-14页 |
| 1.3 鱼类TLRs研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1 鱼类TLRs种类与功能 | 第14-15页 |
| 1.3.2 鱼类TLRs介导的信号传递途径 | 第15-17页 |
| 1.4 鱼类TLR1、TLR3、TLR5研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4.1 鱼类TLR1研究进展 | 第17页 |
| 1.4.2 鱼类TLR3研究进展 | 第17页 |
| 1.4.3 鱼类TLR5研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的、意义及技术路线 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究目的、意义 | 第18-19页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 三个TLR基因的克隆与序列分析 | 第20-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验用鱼及菌种 | 第20页 |
| 2.1.2 实验器材 | 第20-21页 |
| 2.1.3 试剂与溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.1.3.1 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3.2 溶液配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 实验动物组织获取 | 第22页 |
| 2.2.2 总RNA提取和纯度检测 | 第22-23页 |
| 2.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第23-24页 |
| 2.2.4 3' RACE模板合成 | 第24页 |
| 2.2.5 三个TLR蛋白的基因全长克隆 | 第24-28页 |
| 2.2.5.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.5.2 LjTLR1、3、5 序列片段验证 | 第25-26页 |
| 2.2.5.3 PCR产物回收纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.5.4 连接与转化 | 第27页 |
| 2.2.5.5 单克隆挑取与菌液PCR检测 | 第27-28页 |
| 2.2.6 LjTLR1、3、5 基因 3' 末端序列获得 | 第28-30页 |
| 2.2.7 TLR1、3、5 序列生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-49页 |
| 2.3.1 LjTLR1序列生物信息学分析 | 第30-37页 |
| 2.3.2 LjTLR3序列生物信息学分析 | 第37-43页 |
| 2.3.3 LjTLR5序列生物信息学分析 | 第43-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 三个TLR基因的组织表达特征分析 | 第52-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第52页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第52页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.2.1 各组织定量模板逆转录合成 | 第52-53页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR | 第53-54页 |
| 3.3 实验结果 | 第54-57页 |
| 3.3.1 LjTLR1的组织差异表达 | 第54-55页 |
| 3.3.2 LjTLR3的组织差异表达 | 第55-56页 |
| 3.3.3 LjTLR5的组织差异表达 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 在不同细菌刺激下花鲈三个TLR基因的表达差异分析 | 第59-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 实验用鱼及细菌 | 第59页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 溶液配制 | 第59-60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 细菌培养 | 第60页 |
| 4.2.2 细菌悬液制备 | 第60-61页 |
| 4.2.3 细菌刺激实验 | 第61页 |
| 4.2.4 RNA提取 | 第61页 |
| 4.2.5 实时荧光定量反应 | 第61-62页 |
| 4.3 实验结果 | 第62-67页 |
| 4.3.1 LjTLR1在细菌刺激后的差异表达 | 第62-63页 |
| 4.3.2 LjTLR3在细菌刺激后的差异表达 | 第63-65页 |
| 4.3.3 LjTLR5在细菌刺激后的差异表达 | 第65-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-70页 |
| 第五章 原位杂交技术探究三个TLR基因经不同菌刺激后的表达差异 | 第70-77页 |
| 5.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第70页 |
| 5.1.2 实验试剂与溶液配制 | 第70-71页 |
| 5.1.2.1 实验试剂 | 第70-71页 |
| 5.1.2.2 溶液配制 | 第71页 |
| 5.2 实验方法 | 第71-73页 |
| 5.3 实验结果 | 第73-75页 |
| 5.3.1 LjTLR1原位杂交 | 第73-74页 |
| 5.3.2 LjTLR3原位杂交 | 第74页 |
| 5.3.3 LjTLR5原位杂交 | 第74-75页 |
| 5.4 讨论 | 第75-77页 |
| 第六章 三个TLR基因在HEK-293T细胞中的转染表达研究 | 第77-87页 |
| 6.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 6.1.1 实验细胞与载体 | 第77页 |
| 6.1.2 实验器材 | 第77页 |
| 6.1.3 实验试剂与配制 | 第77-78页 |
| 6.2 实验方法 | 第78-84页 |
| 6.2.1 载体构建 | 第78-80页 |
| 6.2.1.1 目的片段获取与载体双酶切 | 第78-80页 |
| 6.2.1.2 重组载体构建与转化 | 第80页 |
| 6.2.2 重组载体质粒抽提 | 第80-81页 |
| 6.2.3 HEK-293T细胞传代与培养 | 第81-82页 |
| 6.2.4 HEK-293T细胞冻存与复苏 | 第82页 |
| 6.2.5 细胞转染与定位 | 第82-84页 |
| 6.3 实验结果 | 第84-85页 |
| 6.3.1 TLR重组质粒在HEK-293T细胞中的表达与定位 | 第84-85页 |
| 6.4 讨论 | 第85-87页 |
| 结论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 附录 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
