| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 导论 | 第13-32页 |
| 1.1 细胞色素P450酶家族简介 | 第13-18页 |
| 1.1.1 细胞色素P450酶的发现与命名 | 第13页 |
| 1.1.2 细胞色素P450酶的功能 | 第13-14页 |
| 1.1.3 细胞色素P450酶发挥功能的影响因素 | 第14-16页 |
| 1.1.4 细胞色素P450酶在药物研发中的重要作用 | 第16-18页 |
| 1.2 CYP2E1简介 | 第18-22页 |
| 1.2.1 CYP2E1概述 | 第18页 |
| 1.2.2 CYP2E1的结构与功能 | 第18-21页 |
| 1.2.3 CYP2E1与疾病的关系 | 第21-22页 |
| 1.3 基因敲除技术 | 第22-28页 |
| 1.3.1 基因敲除技术的发展过程 | 第22-23页 |
| 1.3.2 目前常用的基因敲除方法 | 第23-26页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas技术 | 第26-28页 |
| 1.4 细胞色素P450酶基因敲除动物模型研究进展 | 第28-30页 |
| 1.4.1 Cyp基因敲除小鼠模型的构建及应用 | 第28-29页 |
| 1.4.2 Cyp转基因小鼠模型的构建及应用 | 第29页 |
| 1.4.3 Cyp基因敲除大鼠模型的优势 | 第29-30页 |
| 1.5 Cyp基因敲除大鼠模型的应用 | 第30页 |
| 1.6 本课题的意义与创新之处 | 第30-32页 |
| 第二章 Cyp2e1基因敲除大鼠模型的构建 | 第32-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-35页 |
| 2.1.1 动物 | 第32页 |
| 2.1.2 主要实验试剂及耗材 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第33页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第33-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-47页 |
| 2.2.1 Cyp2e1基因敲除靶点的选择及guideRNA的体外合成 | 第35-37页 |
| 2.2.2 guide RNA与Cas9 mRNA的显微注射及胚胎移植 | 第37-38页 |
| 2.2.3 F0代大鼠基因型鉴定 | 第38-42页 |
| 2.2.4 F1代大鼠基因型鉴定及Cyp2e1敲除大鼠的繁育 | 第42-43页 |
| 2.2.5 F2代大鼠基因型鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.6 脱靶效应检测 | 第44-47页 |
| 第三章 Cyp2e1基因敲除大鼠模型的验证及相关代谢研究 | 第47-67页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-52页 |
| 3.1.1 试剂与耗材 | 第47-48页 |
| 3.1.2 仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第49-52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-67页 |
| 3.2.1 大鼠生理指标的检测 | 第52-53页 |
| 3.2.2 大鼠肝脏与小肠组织苏木精&伊红染色 | 第53-56页 |
| 3.2.3 大鼠肝脏组织mRNA水平表达检测 | 第56-58页 |
| 3.2.4 大鼠肝脏组织CYP2E1蛋白水平表达检测 | 第58-60页 |
| 3.2.5 静脉给药氯唑沙宗体内药代动力学实验 | 第60页 |
| 3.2.6 口服给药氯唑沙宗体内药代动力学实验 | 第60-61页 |
| 3.2.7 大鼠血样处理 | 第61-62页 |
| 3.2.8 氯唑沙宗,6-羟基氯唑沙宗,非那西汀液相方法建立 | 第62-63页 |
| 3.2.9 KO大鼠和WT大鼠肝脏微粒体的制备 | 第63页 |
| 3.2.10 KO大鼠与WT大鼠肝微粒体CYP2E1活性检测 | 第63-64页 |
| 3.2.11 KO大鼠和WT大鼠肝脏主要CYP酶的表达检测 | 第64-67页 |
| 第四章 实验结果与分析 | 第67-89页 |
| 4.1 Cyp2e1大鼠FO代基因型鉴定与繁育 | 第67-69页 |
| 4.2 Cyp2e1 KO大鼠F1代,F2代基因型鉴定及繁育 | 第69-71页 |
| 4.3 脱靶效应检测 | 第71-72页 |
| 4.4 KO大鼠与WT大鼠CYP2E1表达差异 | 第72-73页 |
| 4.5 KO大鼠与WT大鼠生理状态的差异 | 第73-77页 |
| 4.6 KO大鼠与WT大鼠肝脏与小肠结构差异 | 第77-78页 |
| 4.7 KO大鼠与WT大鼠体内代谢功能研究 | 第78-84页 |
| 4.8 CYP2E1探针底物氯唑沙宗液相分析方法的建立 | 第84-86页 |
| 4.8.1 色谱方法的确定 | 第84-85页 |
| 4.8.2 标准曲线 | 第85-86页 |
| 4.9 KO大鼠与WT大鼠体外肝微粒体代谢功能研究 | 第86-87页 |
| 4.10 Cyp2e1基因的敲除对大鼠体内其他CYP酶表达的影响 | 第87-89页 |
| 第五章 总论 | 第89-95页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 附录Ⅰ 缩略词及中英文对照表 | 第101-103页 |
| 附录Ⅱ 硕士期间科研成果 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
