| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 纤维素及其结构与分类 | 第13-14页 |
| 1.2 细菌纤维素的合成 | 第14-15页 |
| 1.3 植物纤维素的合成 | 第15-23页 |
| 1.3.1 纤维素合成酶复合体 | 第15-17页 |
| 1.3.1.1 纤维素合成酶复合体的结构 | 第15-16页 |
| 1.3.1.2 与CSCs相关的因子 | 第16-17页 |
| 1.3.2 纤维素合成酶 | 第17-21页 |
| 1.3.2.1 纤维素合成酶基因的结构 | 第17-18页 |
| 1.3.2.2 纤维素合成酶基因的表达规律 | 第18-19页 |
| 1.3.2.3 纤维素合成酶基因的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2.4 纤维素合成酶相似蛋白家族 | 第20-21页 |
| 1.3.3 纤维素的合成 | 第21-22页 |
| 1.3.4 研究纤维素合成酶的意义和方法 | 第22-23页 |
| 1.4 病毒诱导的基因沉默 | 第23-25页 |
| 1.4.1 VIGS在基因功能研究中的应用 | 第23-24页 |
| 1.4.2 植物VIGS体系 | 第24-25页 |
| 1.4.3 植物VIGS体系的优化 | 第25页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第25-26页 |
| 2 实验材料与方法 | 第26-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株 | 第26页 |
| 2.1.3 病毒载体 | 第26页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第26-27页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-45页 |
| 2.2.1 植物组织样品RNA的提取 | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 实验器具处理与药品配置 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第31-32页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第32页 |
| 2.2.4 PhCESA33’UTR基因片段的克隆 | 第32-34页 |
| 2.2.4.1 PCR引物设计 | 第32-33页 |
| 2.2.4.2 PCR扩增与检测 | 第33页 |
| 2.2.4.3 PCR产物的回收 | 第33-34页 |
| 2.2.5 载体质粒的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.6 构建重组载体pTRV2-PhCESA3 | 第35-37页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌DH5α 感受态的制备 | 第35页 |
| 2.2.6.2 目的片段与载体连接 | 第35-36页 |
| 2.2.6.3 重组载体转化大肠杆菌 | 第36-37页 |
| 2.2.6.4 阳性克隆的鉴定 | 第37页 |
| 2.2.6.5 重组质粒的抽提 | 第37页 |
| 2.2.7 重组载体导入农杆菌 | 第37-39页 |
| 2.2.7.1 农杆菌感受态的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.7.2 重组质粒导入农杆菌 | 第38-39页 |
| 2.2.8 农杆菌侵染矮牵牛植株 | 第39页 |
| 2.2.8.1 侵染液的配制 | 第39页 |
| 2.2.8.2 侵染方法 | 第39页 |
| 2.2.9 表型观察及材料处理 | 第39-43页 |
| 2.2.9.1 表型观察及数据记录 | 第39页 |
| 2.2.9.2 临时装片制作 | 第39-40页 |
| 2.2.9.3 扫描电子显微镜样品制作 | 第40-41页 |
| 2.2.9.4 透射电子显微镜样品制作 | 第41页 |
| 2.2.9.5 半薄切片样品制作 | 第41-42页 |
| 2.2.9.6 石蜡切片样品制作 | 第42-43页 |
| 2.2.10 叶片纤维素含量测定 | 第43-44页 |
| 2.2.10.1 绘制纤维素标准曲线 | 第43-44页 |
| 2.2.10.2 样品纤维素含量测定 | 第44页 |
| 2.2.10.3 结果计算 | 第44页 |
| 2.2.11 PhCESA3对植株育性的影响研究 | 第44-45页 |
| 2.2.11.1 人工杂交授粉试验 | 第44页 |
| 2.2.11.2 统计数据并分析 | 第44页 |
| 2.2.11.3 种子发芽率测定 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-65页 |
| 3.1 PhCESA3蛋白生物信息学分析 | 第45-49页 |
| 3.1.1 PhCESA3蛋白结构分析 | 第45-46页 |
| 3.1.2 蛋白进化树分析 | 第46-47页 |
| 3.1.3 PhCESA3蛋白氨基酸序列比对分析 | 第47-49页 |
| 3.2 荧光定量表达结果分析 | 第49-50页 |
| 3.2.1 PhCESA3在不同组织中的表达分析 | 第49页 |
| 3.2.2 PhCESA3在花蕾不同发育阶段的表达分析 | 第49-50页 |
| 3.3 构建VIGS载体 | 第50-52页 |
| 3.3.1 PhCESA33’UTR片段克隆 | 第50页 |
| 3.3.2 提取载体质粒 | 第50-51页 |
| 3.3.3 PhCESA33’UTR片段插入载体 | 第51-52页 |
| 3.3.4 重组载体导入农杆菌 | 第52页 |
| 3.4 PhCESA3沉默后植株表型变化 | 第52-55页 |
| 3.4.1 PhCESA3沉默后植株表型变化 | 第52-54页 |
| 3.4.2 植株表型变化数据统计结果 | 第54-55页 |
| 3.5 PhCESA3沉默降低叶片纤维素含量 | 第55页 |
| 3.6 PhCESA3沉默后组织显微结构观察结果 | 第55-64页 |
| 3.6.1 临时装片观察结果 | 第55-59页 |
| 3.6.2 环境扫描电子显微镜观察结果 | 第59-60页 |
| 3.6.3 透射电子显微镜观察结果 | 第60-61页 |
| 3.6.4 半薄切片观察结果 | 第61-62页 |
| 3.6.5 石蜡切片观察结果 | 第62-64页 |
| 3.7 PhCESA3沉默降低植株育性 | 第64-65页 |
| 4 讨论与结论 | 第65-69页 |
| 4.1 讨论 | 第65-67页 |
| 4.2 结论 | 第67-68页 |
| 4.3 本研究的创新之处 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附录A | 第78-81页 |
| 附录B | 第81-82页 |
| 附录C | 第82页 |
