| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写词表 | 第10-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-16页 |
| 1. 猪痘病毒及其作为载体的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1 猪痘病毒的概述 | 第11页 |
| 1.2 猪痘病毒的分子生物学特性 | 第11页 |
| 1.3 猪痘病毒载体的研究进展 | 第11-13页 |
| 2. 圆环病毒2型研究进展 | 第13-14页 |
| 2.1 圆环病毒概述 | 第13页 |
| 2.2 圆环病毒编码蛋白 | 第13-14页 |
| 2.3 猪圆环病毒2型疫苗的研究进展 | 第14页 |
| 3. 拷贝数与蛋白表达量关系的论述 | 第14-15页 |
| 4. 单克隆抗体的研究进展 | 第15-16页 |
| 第二章 猪圆环病毒2型（PCV2）单克隆抗体的制备 | 第16-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第16-18页 |
| 2.2 主要仪器及设备 | 第18页 |
| 2.3 实验方法 | 第18-23页 |
| 2.3.1 抗原的制备 | 第18页 |
| 2.3.2 免疫小鼠 | 第18-19页 |
| 2.3.3 间接ELISA检测方法的建立 | 第19页 |
| 2.3.4 细胞融合 | 第19-20页 |
| 2.3.5 杂交瘤细胞筛选 | 第20-21页 |
| 2.3.6 阳性杂交瘤细胞亚克隆 | 第21页 |
| 2.3.7 单克隆抗体Western-blot的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.3.8 单克隆抗体的大量制备及腹水纯化 | 第22-23页 |
| 2.4 单克隆抗体的应用 | 第23-24页 |
| 2.4.1 免疫荧光检测 | 第23页 |
| 2.4.2 免疫组化检测 | 第23-24页 |
| 2.5 实验结果 | 第24-28页 |
| 2.5.1 小鼠免疫抗体结果 | 第24页 |
| 2.5.2 细胞融合 | 第24页 |
| 2.5.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第24-25页 |
| 2.5.4 单克隆抗体Western-blot结果 | 第25页 |
| 2.5.5 腹水纯化SDS-PAGE结果 | 第25-26页 |
| 2.5.6 腹水纯化Western-blot结果 | 第26页 |
| 2.5.7 单克隆抗体的应用 | 第26-28页 |
| 2.6 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 多拷贝圆环病毒2型ORF2基因重组猪痘病毒的构建 | 第29-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 3.1.1 细胞和病毒 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第29-30页 |
| 3.1.4 主要仪器及设备 | 第30-31页 |
| 3.1.5 P28启动子及ORF2引物设计 | 第31-32页 |
| 3.2 多拷贝ORF2重组猪痘病毒载体构建实验方法 | 第32-41页 |
| 3.2.1 病料处理及DNA提取 | 第32-33页 |
| 3.2.2 ORF2基因的扩增 | 第33页 |
| 3.2.3 PCR产物胶回收 | 第33-34页 |
| 3.2.4 质粒提取 | 第34页 |
| 3.2.5 pSWE11与P28-ORF2的双酶切 | 第34页 |
| 3.2.6 pSWE11与P28-ORF2的连接 | 第34-35页 |
| 3.2.7 连接产物的转化 | 第35页 |
| 3.2.8 阳性克隆的筛选 | 第35-36页 |
| 3.2.9 阳性克隆酶切验证 | 第36页 |
| 3.2.10 质粒的测序 | 第36页 |
| 3.2.11 多拷贝ORF2重组猪痘病毒构建流程图 | 第36-41页 |
| 3.3 重组质粒转染及纯化 | 第41-43页 |
| 3.3.1 转染质粒的准备 | 第41页 |
| 3.3.2 转染 | 第41-42页 |
| 3.3.3 重组病毒的纯化 | 第42页 |
| 3.3.4 重组病毒的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.5 重组猪痘病毒感染PK15细胞荧光斑大小 | 第43页 |
| 3.3.6 重组猪痘病毒对PK15细胞的TCID50 | 第43页 |
| 3.3.7 重组病毒的Western-blot分析 | 第43页 |
| 3.4 实验结果 | 第43-57页 |
| 3.4.1 不同P28-ORF2片段PCR扩增 | 第43-44页 |
| 3.4.2 1-8 拷贝p28-ORF2克隆菌液PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| 3.4.3 1-8 拷贝p28-ORF2重组质粒双酶切结果 | 第45-46页 |
| 3.4.4 重组猪痘病毒转染 | 第46-47页 |
| 3.4.5 重组猪痘病毒纯化 | 第47-48页 |
| 3.4.6 1-8 拷贝P28-ORF2重组猪痘病毒扩增结果 | 第48-49页 |
| 3.4.7 1-8 拷贝P28-ORF2重组猪痘病毒纯化的PCR鉴定 | 第49-52页 |
| 3.4.8 1-8 拷贝重组猪痘病毒感染PK15细胞荧光斑大小 | 第52-53页 |
| 3.4.9 重组猪痘病毒对PK15细胞的TCID50 | 第53-56页 |
| 3.4.10 重组猪痘病毒的Western-blot结果 | 第56-57页 |
| 3.4.11 重组病毒超薄切片观察 | 第57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
