| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| 1 烟曲霉的简介 | 第10-12页 |
| 1.1 烟曲霉的生长特征 | 第10-11页 |
| 1.2 烟曲霉的致病性 | 第11-12页 |
| 2 抗真菌药物的研究现状 | 第12-15页 |
| 2.1 曲霉病的概述 | 第12-13页 |
| 2.2 抗真菌药物的概述 | 第13-15页 |
| 3 烟曲霉对唑类药物耐受机制的研究现状 | 第15-18页 |
| 3.1 药物-靶蛋白间亲和力的降低 | 第16-17页 |
| 3.2 靶蛋白的高表达 | 第17页 |
| 3.3 药物外排泵的高表达 | 第17页 |
| 3.4 药物响应途径的改变 | 第17-18页 |
| 4 烟曲霉中麦角固醇的研究现状 | 第18-22页 |
| 4.1 麦角固醇及其功能的简介 | 第18-19页 |
| 4.2 麦角固醇合成途径的简介 | 第19-20页 |
| 4.3 麦角固醇相关基因的研究进展 | 第20-22页 |
| 4.3.1 烟曲霉麦角固醇相关基因的研究现状 | 第20-21页 |
| 4.3.2 erg4基因的研究现状 | 第21-22页 |
| 5 本课题的研究内容及思路 | 第22-23页 |
| 5.1 研究内容 | 第22页 |
| 5.2 研究思路 | 第22-23页 |
| 第二章 烟曲霉Erg4A和Erg4B相互关系的探究 | 第23-41页 |
| 第一节 Erg4A和Erg4B蛋白结构域的分析比较 | 第23-25页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24页 |
| 3 实验结果 | 第24-25页 |
| 3.1 Erg4A和Erg4B蛋白序列相似性的分析结果 | 第24页 |
| 3.2 Erg4A和Erg4B蛋白结构域的分析结果 | 第24-25页 |
| 4 讨论 | 第25页 |
| 第二节 Erg4A和Erg4B亚细胞定位的分析比较 | 第25-37页 |
| 1 荧光标记菌株的构建 | 第26-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.1.1 菌株、质粒、培养基与培养条件 | 第26-27页 |
| 1.1.2 试剂与仪器 | 第27页 |
| 1.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 1.2.1 GFP-Erg4A和Erg4B-GFP菌株构建原理及引物设计 | 第27-29页 |
| 1.2.2 GFP-Erg4A转化质粒的构建 | 第29-30页 |
| 1.2.3 Erg4B-GFP转化质粒的构建 | 第30-31页 |
| 1.2.4 烟曲霉的转化实验 | 第31-32页 |
| 1.3 实验结果 | 第32-33页 |
| 2 Erg4A与Erg4B亚细胞定位的观察 | 第33-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.1.1 菌株、培养基与培养条件 | 第33页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-36页 |
| 2.3.1 Erg4A和Erg4B均定位于内质网 | 第34-35页 |
| 2.3.2 Erg4A和Erg4B的荧光标记不影响蛋白功能及菌株的生长 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三节 Erg4A和Erg4B转录水平的分析比较 | 第37-41页 |
| 1 实验材料 | 第37页 |
| 1.1 菌株、培养基与培养条件 | 第37页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-40页 |
| 3.1 烟曲霉总RNA的提取结果 | 第38-39页 |
| 3.2 erg4A与erg4B在控制麦角固醇合成过程中存在互补作用 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 烟曲霉Erg4在产孢及菌丝生长过程中的生物学功能研究 | 第41-48页 |
| 1 实验材料 | 第41页 |
| 1.1 菌株、培养基与培养条件 | 第41页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-42页 |
| 2.1 固体菌丝的培养及显微观察(固体插片法) | 第41页 |
| 2.2 液体菌丝的培养及显微观察(液体制片法) | 第41-42页 |
| 3 实验结果 | 第42-45页 |
| 3.1 erg4A和erg4B的同时缺失严重影响产孢结构的形成 | 第42页 |
| 3.2 外源添加麦角固醇能部分恢复△erg4A△ erg4B菌株的产孢缺陷 | 第42-44页 |
| 3.3 erg4的缺失不影响液体菌丝的正常生长 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 第四章 烟曲霉erg4缺失菌株对各种压力试剂及抗真菌药物的敏感性测试 | 第48-57页 |
| 第一节 erg4缺失菌株对渗透压力、氧化应激压力及细胞壁破坏试剂的敏感性测试 | 第48-51页 |
| 1 实验材料 | 第48页 |
| 1.1 菌株、培养基与培养条件 | 第48页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51页 |
| 第二节 erg4缺失菌株对抗真菌药物的敏感性测试 | 第51-57页 |
| 1 实验材料 | 第51-52页 |
| 1.1 菌株、培养基与培养条件 | 第51页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52页 |
| 2.1 固体含药物平板上的测试方法(稀释点菌法) | 第52页 |
| 2.2 最小抑菌浓度(MIC)的测定方法(E-test法) | 第52页 |
| 3 实验结果 | 第52-55页 |
| 3.1 erg4缺失菌株对唑类抗真菌药物的敏感性测试结果 | 第52-54页 |
| 3.1.1 固体含药物平板上的测试结果 | 第52-53页 |
| 3.1.2 最小抑菌浓度(MIC)的测试结果 | 第53-54页 |
| 3.2 erg4缺失菌株对其他抗真菌药物的敏感性测试结果 | 第54页 |
| 3.3 外源添加麦角固醇不能恢复erg4缺失菌株对抗真菌药物敏感性的变化 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 烟曲霉erg4双突变菌株的毒力分析 | 第57-61页 |
| 1 实验材料 | 第57页 |
| 1.1 菌株、培养基与培养条件 | 第57页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-58页 |
| 2.1 待测烟曲霉孢悬液的制备 | 第57-58页 |
| 2.2 小鼠模型的构建 | 第58页 |
| 2.3 实验小鼠病理切片的分析 | 第58页 |
| 3 实验结果 | 第58-60页 |
| 3.1 实验小鼠死亡原因的初步分析 | 第58-59页 |
| 3.2 实验小鼠存活曲线的结果分析 | 第59-60页 |
| 3.3 实验小鼠肺组织病理切片的结果分析 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 全文总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录一 | 第72-73页 |
| 附录二 | 第73-74页 |
| 附录三 | 第74-76页 |
| 附录四 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
