| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-9页 |
| 第一部分 文献综述哺乳动物Cathelicidins 抗菌肽的研究进展 | 第9-20页 |
| 1 Cathelicidins 抗菌肽基因组成及前体肽结构 | 第10-11页 |
| 2 Cathelicidins 抗菌肽的分类 | 第11-12页 |
| 3 Cathelicidins 抗菌肽的合成与分布 | 第12-13页 |
| 4 Cathelicidins 抗菌肽的生物学作用 | 第13-16页 |
| ·抵抗病原微生物 | 第13-14页 |
| ·促进创伤修复 | 第14页 |
| ·促进血管生成 | 第14-15页 |
| ·趋化作用 | 第15页 |
| ·抑制组织损伤 | 第15页 |
| ·结合内毒素 | 第15-16页 |
| ·细胞溶解效应 | 第16页 |
| 5 牛内源性Cathelicidins 抗菌肽 | 第16-18页 |
| ·BMAPs | 第16页 |
| ·Bac5 和Bac7 | 第16-17页 |
| ·Indolicidin | 第17-18页 |
| ·Dodecapeptide | 第18页 |
| 6 小结 | 第18-20页 |
| 第二部分 实验研究牛Bac5 抗菌肽基因的克隆、表达及鉴定 | 第20-44页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 1 材料 | 第22-25页 |
| ·牛股骨 | 第22页 |
| ·载体与菌株 | 第22页 |
| ·工具酶与生化试剂 | 第22页 |
| ·常规试剂 | 第22-24页 |
| ·仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-36页 |
| ·牛骨髓的采集 | 第25页 |
| ·总RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·提取的总RNA 的检测 | 第26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·RT-PCR 扩增目的片段 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 产物 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR 产物的回收与纯化 | 第28页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第28-32页 |
| ·PET-28a 表达载体和目的片段的双酶切 | 第28-29页 |
| ·双酶切产物的回收与纯化 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆菌的PCR 鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第31-32页 |
| ·目的片段的序列分析及其编码蛋白质的结构预测 | 第32页 |
| ·重组表达质粒转化E.coli Rosetta 感受态细胞 | 第32页 |
| ·重组表达菌的测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定表达产物 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第34-36页 |
| ·诱导菌液的处理 | 第34-35页 |
| ·菌体蛋白浓度的测定 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白浓度的计算 | 第36页 |
| ·重组蛋白抑菌活性鉴定 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-41页 |
| ·总RNA 提取 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR 扩增目的片段 | 第37页 |
| ·pET28a-Bac5 重组表达质粒的构建 | 第37页 |
| ·pET28a-Bac5 重组表达质粒的测序鉴定及序列分析 | 第37-40页 |
| ·Bac5 抗菌肽物化特性分析 | 第40页 |
| ·Bac5 分子的结构预测 | 第40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 鉴定 | 第40页 |
| ·Bradford 法标准曲线绘制 | 第40-41页 |
| ·抑菌实验结果 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-57页 |
| 附录一 GeneBank 收录牛的Bac5 前体肽基因序列 | 第51-53页 |
| 附录二 测序报告 | 第53-54页 |
| 附录三 奶牛Bac5 基因的碱基序列及推导出的氨基酸序列 | 第54-55页 |
| 附录四 pET28a 原核表达载体结构图 | 第55-56页 |
| 附录五 pET28a-Bac5 重组表达质粒构建模式图 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 导师简介 | 第59-60页 |
