| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略语 | 第17-21页 |
| 前言 | 第21-25页 |
| 第一部分 文献综述 | 第25-53页 |
| 第一章 WD40结构域细胞功能的概述 | 第25-35页 |
| 一、WD40结构域拥有多种细胞功能 | 第25-27页 |
| 二、WD40结构域在真核生物的蛋白质组中含量丰富 | 第27页 |
| 三、WD40是否是细胞中最普遍的互作因子 | 第27-32页 |
| (一) β转运蛋白:与α、γ亚基组成复合体的WD40原型 | 第28页 |
| (二) WD40-WD40互作为复合体组装提供平台 | 第28-29页 |
| (三) WD40蛋白Sro7起支架调控作用 | 第29-30页 |
| (四) WD40蛋白为肽链基序互作提供特殊平台 | 第30-31页 |
| (五) β-发夹为WD40-蛋白互作提供平台 | 第31页 |
| (六) 通过核孔复合体蛋白中的供体片完成螺旋桨结构 | 第31-32页 |
| (七) WD40-DNA与紫外DNA-损失结合复合体的互作 | 第32页 |
| 四、为什么形成WD40结构域? | 第32-33页 |
| 五、结语 | 第33-35页 |
| 第二章 植物生长素信号通路的概述 | 第35-41页 |
| 一、生长素的受体 | 第36-37页 |
| 二、ARFs和Aux/IAA的作用机制研究 | 第37-39页 |
| 三、生长素与植物防卫反应 | 第39-41页 |
| 第三章 植物防卫反应与抗病信号传导通路 | 第41-53页 |
| 一、植物的抗病反应 | 第41-42页 |
| 二、植物防卫病害的机制 | 第42-44页 |
| 三、参与植物防卫反应的信号分子 | 第44-47页 |
| (一) 水杨酸(SA) | 第44-45页 |
| (二) 茉莉酸(jasmonic acid,JA)和乙烯(ethylene,ET) | 第45-46页 |
| (三) 过氧化氢(H_2O_2) | 第46-47页 |
| 四、植物防卫信号传导通路 | 第47-52页 |
| (一) 依赖SA的防卫反应信号传导通路 | 第47页 |
| (二) 抗病基因介导的防卫信号传导通路 | 第47-49页 |
| (三) H_2O_2介导的信号传导通路 | 第49-50页 |
| (四) 植物防卫反应信号传导通路拮抗及协同作用 | 第50-51页 |
| (五) 依赖于茉莉酸和乙烯的防卫信号途径 | 第51-52页 |
| 五、结语 | 第52-53页 |
| 第二部分 研究内容 | 第53-117页 |
| 第一章 NtARF8,NtARF17,NtARF19参与NtTTG2调控的植物生长功能通路 | 第53-69页 |
| 1 材料与方法 | 第53-60页 |
| 1.1 植物材料 | 第53-54页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第54-55页 |
| 1.3 Northern blot测定NAA处理后NtTTG2的表达情况 | 第55-58页 |
| 1.3.1 RNA的提取 | 第55页 |
| 1.3.2 RNA甲醛凝胶变性电泳 | 第55-57页 |
| 1.3.3 变性RNA在膜上转移及固定 | 第57页 |
| 1.3.4 探针的标记 | 第57页 |
| 1.3.5 预杂交和杂交 | 第57-58页 |
| 1.3.6 洗膜和显影 | 第58页 |
| 1.4 生长素含量的测定 | 第58页 |
| 1.5 不同基因型烟草的产生 | 第58-59页 |
| 1.6 荧光定量RT-PCR (qRT-PCR) | 第59-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-67页 |
| 2.1 NtTTG2能感应生长素但是不影响烟草内源生长素的含量 | 第60-62页 |
| 2.2 12个受NtTTG2调控的NtARF基因的命名 | 第62-63页 |
| 2.3 成功获得NtARF基因瞬时沉默的转基因植株 | 第63-65页 |
| 2.4 沉默NtARF基因后植物生长表型鉴定 | 第65-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 第二章 NtARF8作为转录激活子促进植物生长发育 | 第69-83页 |
| 1 材料与方法 | 第69-75页 |
| 1.1 植物材料 | 第69-70页 |
| 1.2 测定温室中烟草的生长 | 第70页 |
| 1.3 VIGS | 第70页 |
| 1.4 烟草种子数量 | 第70页 |
| 1.5 基因的表达与检测 | 第70页 |
| 1.6 凝胶迁移或电泳迁移率实验(GMSA) | 第70-72页 |
| 1.6.1 探针的标记 | 第71页 |
| 1.6.2 核蛋白的制备 | 第71页 |
| 1.6.3 非变性电泳 | 第71-72页 |
| 1.7 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第72-75页 |
| 1.7.1 Chromatin crosslinking | 第73页 |
| 1.7.2 Chromatin preparation | 第73-74页 |
| 1.7.3 Pre-clearing and immunoprecipitation(IP) | 第74页 |
| 1.7.4 Collection, washes and elution of immune complexes | 第74页 |
| 1.7.5 Reverse crosslinking | 第74-75页 |
| 1.7.6 DNA cleanup | 第75页 |
| 1.8 数据处理 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-80页 |
| 2.1 NtARF8是NtTTG2介导的生长功能通路中的主要调控因子 | 第75-77页 |
| 2.2 NtARF8正调控烟草种子的产量 | 第77-78页 |
| 2.3 NtARF8是一个功能转录激活子 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 第三章 NtTTG2通过促进NtARF8的细胞核定位从而增强它作为转录激活子的作用 | 第83-99页 |
| 1 材料与方法 | 第83-91页 |
| 1.1 植物材料 | 第83-84页 |
| 1.2 烟草根部细胞基因瞬时表达 | 第84页 |
| 1.2.1 载体构建 | 第84页 |
| 1.2.2 根细胞的瞬时侵染与荧光观察 | 第84页 |
| 1.3 酵母双杂交验证NtTTG2与NtARF8的互作 | 第84-87页 |
| 1.3.1 载体构建 | 第85-86页 |
| 1.3.2 互作验证 | 第86-87页 |
| 1.4 BiFC验证NtTTG2与NtARF8的互作 | 第87-89页 |
| 1.4.1 载体的构建 | 第87-88页 |
| 1.4.2 烟草叶片上的BiFC | 第88-89页 |
| 1.5 植物蛋白的提取 | 第89-90页 |
| 1.5.1 植物总蛋白的提取 | 第89页 |
| 1.5.2 植物细胞核蛋白的分离 | 第89-90页 |
| 1.6 SDS-PAGE及Western blot分析 | 第90-91页 |
| 1.6.1 SDS-PAGE电泳、转印、洗膜 | 第90页 |
| 1.6.2 Western blot分析 | 第90-91页 |
| 1.7 GMSA(凝胶迁移率分析)和ChIP(染色质免疫共沉淀) | 第91页 |
| 1.8 基因表达检测 | 第91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-95页 |
| 2.1 NtTTG2与NtARF8不发生直接互作 | 第91-92页 |
| 2.2 NtTTG2促进NtARF8定位在细胞核 | 第92-93页 |
| 2.3 NtTTG2通过促进NtARF8的细胞核定位从而增强它作为转录激活子的作用 | 第93-95页 |
| 3 讨论 | 第95-99页 |
| 第四章 NtTTG2和NtARF8对烟草抗病性的影响 | 第99-107页 |
| 1 材料与方法 | 第99-102页 |
| 1.1 菌株 | 第99页 |
| 1.2 植物材料 | 第99页 |
| 1.3 VIGS得到不同基因型烟草 | 第99-100页 |
| 1.4 TMV和Pcc的处理及检测 | 第100-101页 |
| 1.5 TMVCP基因的检测 | 第101-102页 |
| 1.5.1 总RNA的抽提 | 第101页 |
| 1.5.2 荧光定量RT-PCR | 第101-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-104页 |
| 2.1 不同基因型烟草接种TMV发病症状观察及相关基因的检测 | 第102-103页 |
| 2.2 不同基因型烟草接种Pcc发病症状观察和发病情况定量分析 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-107页 |
| 第五章 酵母双杂筛选AtTTG1蛋白的互作因子 | 第107-117页 |
| 1 材料与方法 | 第107-112页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第107页 |
| 1.2 编码AtTTG1的基因及拟南芥cDNA文库 | 第107页 |
| 1.3 cDNA文库的扩增及切割 | 第107-112页 |
| 1.3.1 文库扩增 | 第108-109页 |
| 1.3.2 扩增后文库滴度的测定 | 第109-110页 |
| 1.3.3 文库切割 | 第110页 |
| 1.3.4 文库质粒的大量提取 | 第110-111页 |
| 1.3.5 拟南芥cDNA文库的筛选 | 第111-112页 |
| 2 结果与分析 | 第112-115页 |
| 2.1 菌落PCR验证得到35个阳性克隆 | 第112-113页 |
| 2.2 阳性克隆cDNA片段的序列测定及序列比对 | 第113-115页 |
| 3 讨论 | 第115-117页 |
| 总结与展望 | 第117-121页 |
| 参考文献 | 第121-139页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
