| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 葡萄糖氧化酶概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 葡萄糖氧化酶概述 | 第9页 |
| 1.1.2 葡萄糖氧化酶的性质 | 第9-10页 |
| 1.1.3 葡萄糖氧化酶的应用 | 第10-11页 |
| 1.2 葡萄糖氧化酶的生产 | 第11-12页 |
| 1.2.1 葡萄糖氧化酶的来源 | 第11页 |
| 1.2.2 葡萄糖氧化酶研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 解脂耶氏酵母表达系统 | 第12-15页 |
| 1.3.1 解脂耶氏酵母简介 | 第12-14页 |
| 1.3.2 解脂耶氏酵母表达系统 | 第14-15页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第15-16页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-24页 |
| 2.1 材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 仪器与试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.3 培养基 | 第19页 |
| 2.2 操作方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 分子生物学操作 | 第19-20页 |
| 2.2.2 Aspergillus niger GOD基因的克隆与分析 | 第20页 |
| 2.2.3 表达载体p INA1297/GOD的构建与转化 | 第20页 |
| 2.2.4 等离子诱变方法 | 第20-21页 |
| 2.2.5 高通量筛选方法 | 第21页 |
| 2.2.6 重组GOD的分离纯化方法 | 第21页 |
| 2.2.7 重组GOD酶学性质研究方法 | 第21-22页 |
| 2.3 菌体培养方法 | 第22页 |
| 2.3.1 种子培养 | 第22页 |
| 2.3.2 发酵培养 | 第22页 |
| 2.3.3 NBS 3 L发酵罐培养 | 第22页 |
| 2.4 分析方法 | 第22-24页 |
| 2.4.1 GOD酶活力测定 | 第22页 |
| 2.4.2 残余甘油浓度测定 | 第22-23页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.4.4 蛋白浓度的测定 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-42页 |
| 3.1 黑曲霉葡萄糖氧化酶基因在Yarrowia lipolytica中的表达和发酵优化 | 第24-35页 |
| 3.1.1 表达载体p INA1297/GOD的构建 | 第24-25页 |
| 3.1.2 重组酵母的构建与GOD的分泌表达 | 第25-26页 |
| 3.1.3 碳源对菌体生长和GOD产量的影响 | 第26-28页 |
| 3.1.4 氮源对菌体生长和GOD产量的影响 | 第28页 |
| 3.1.5 无机盐对菌体生长和GOD产量的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.6 pH对菌体生长和GOD产量的影响 | 第29页 |
| 3.1.7 发酵培养基的正交设计优化 | 第29-31页 |
| 3.1.8 摇瓶发酵条件优化前后GOD产量对比 | 第31页 |
| 3.1.9 3L罐上GOD的发酵生产 | 第31-32页 |
| 3.1.10 改进pH控制策略 | 第32-34页 |
| 3.1.11 甘油补料对 3 L罐发酵产酶的影响 | 第34-35页 |
| 3.2 常压室温等离子体(ARTP)诱变及高通量筛选葡萄糖氧化酶高产菌株 | 第35-38页 |
| 3.2.1 ARTP致死率曲线测定 | 第35-36页 |
| 3.2.2 突变菌株的筛选 | 第36页 |
| 3.2.3 突变菌生物学特性研究 | 第36-37页 |
| 3.2.4 突变菌的发酵特性研究 | 第37-38页 |
| 3.2.5 突变菌的遗传稳定性研究 | 第38页 |
| 3.3 重组葡萄糖氧化酶的分离纯化和酶学性质研究 | 第38-42页 |
| 3.3.1 重组GOD的分离纯化 | 第38-39页 |
| 3.3.2 温度对重组GOD酶活力的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.3 pH对重组GOD酶活力的影响 | 第40页 |
| 3.3.4 金属离子对重组GOD酶活力的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.5 重组GOD动力学参数分析 | 第41-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
