| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 1.1 miRNA的概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 miRNA的发现及起源 | 第15-16页 |
| 1.1.2 成熟miRNA的生成 | 第16页 |
| 1.1.3 miRNA的调控机制及功能 | 第16-17页 |
| 1.1.4 miRNA的预测及功能鉴定 | 第17-18页 |
| 1.2 脂肪组织的增殖分化 | 第18-20页 |
| 1.2.1 脂肪组织 | 第18-19页 |
| 1.2.2 miRNA调控脂肪分化 | 第19页 |
| 1.2.3 脂肪细胞形成的转录调控 | 第19-20页 |
| 1.3 miRNA靶向转录因子基因调控脂肪分化 | 第20-22页 |
| 1.3.1 PPARs转录因子 | 第20页 |
| 1.3.2 C/EBPs转录因子 | 第20-21页 |
| 1.3.3 IGF1R基因 | 第21-22页 |
| 1.4 miRNAs调控信号通路基因影响脂肪细胞分化 | 第22-23页 |
| 1.5 miR-455-5p研究进展 | 第23页 |
| 1.6 目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 猪miR-455-5p组织表达谱分析 | 第24-36页 |
| 2.1 试验材料与方法 | 第24页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 靶标预测 | 第24-25页 |
| 2.2.2 荧光定量引物设计 | 第25页 |
| 2.2.3 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 RNA的反转录 | 第26-27页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.2.6 数据统计分析 | 第28页 |
| 2.3. 试验结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.3.1 靶标基因预测 | 第28-30页 |
| 2.3.2 组织总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.3 不同时期mR-455-5p在脂肪中的表达规律分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 不同时期IGF1R在脂肪中的表达规律分析 | 第32-33页 |
| 2.3.5 miR-455-5p和IGF1R的表达相关分析 | 第33页 |
| 2.3.6 不同组织miR-455-5p的表达情况分析 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 2.4.1 靶基因预测 | 第34页 |
| 2.4.2 不同时期miR-455-5p在猪组织中表达情况 | 第34-35页 |
| 2.4.3 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 miR-455-5p慢病毒表达载体的构建及鉴定 | 第36-49页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.2 主要设备仪器 | 第37页 |
| 3.2 试验方法 | 第37-42页 |
| 3.2.1 广西巴马小型猪和长白猪基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.2 miRNA引物设计与合成 | 第38页 |
| 3.2.3 pre-miR-455-5p的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 3.2.4 PCR产物回收与pMD-18T Simple连接 | 第39页 |
| 3.2.5 重组质粒的转化 | 第39-40页 |
| 3.2.6 pMD-18T-mir-455-5p重组质粒的鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-48页 |
| 3.3.1 猪基因组DNA提取质量检测 | 第42-43页 |
| 3.3.2 PCR扩增结果 | 第43页 |
| 3.3.3 PMD-18T-miR-455-5p重组质粒鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.3.4 PMD-18T-miR-455-5p菌落PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.5 测序鉴定结果 | 第45页 |
| 3.3.6 质粒双酶切鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.3.7 pLV-miR-455-5p质粒转染3T3-L1细胞 | 第46-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 miR-455-5p靶向IGF1R基因验证 | 第49-61页 |
| 4.1 试验材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 载体设计和细胞来源 | 第49页 |
| 4.1.2 主要试剂、耗材 | 第49-50页 |
| 4.2 试验方法 | 第50-55页 |
| 4.2.1 猪基因组DNA的提取 | 第50页 |
| 4.2.2 正常靶标载体IGF1R-WT的构建 | 第50-51页 |
| 4.2.3 突变靶标载体IGF1R-MUT的构建 | 第51-52页 |
| 4.2.4 293T细胞的培养 | 第52-53页 |
| 4.2.5 细胞转染、双荧光素酶报告载体的检测 | 第53-54页 |
| 4.2.6 双荧光素酶相对活性的检测 | 第54-55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-59页 |
| 4.3.1 IGF1R-WT靶标载体构建结果 | 第55-57页 |
| 4.3.2 IGF1R-MUT突变靶标载体构建 | 第57-58页 |
| 4.3.3 测序鉴定IGF1R-MUT突变靶标 | 第58-59页 |
| 4.3.4 双荧光素酶报告基因检测 | 第59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 4.5 小结 | 第60-61页 |
| 第五章 miR-455-5p在3T3-L1细胞中的功能验证 | 第61-75页 |
| 5.1 试验材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 细胞来源 | 第61页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第61页 |
| 5.1.3 试剂配制 | 第61-62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 5.2.1 引物设计与合成 | 第62页 |
| 5.2.2 3T3-L1细胞的培养 | 第62-65页 |
| 5.3 结果及分析 | 第65-72页 |
| 5.3.1 3T3-L1细胞分化过程细胞形态变化 | 第65-67页 |
| 5.3.2 miR-455-5p在3T3-L1细胞分化过程中的表达分析 | 第67页 |
| 5.3.3 IGF1R基因在3T3-L1细胞分化过程中的表达 | 第67-68页 |
| 5.3.4 PPARγ和C/EBPα基因在3T3-L1细胞分化过程中的表达情况 | 第68-69页 |
| 5.3.5 过表达miR-455-5P抑制3T3-L1细胞分化 | 第69-70页 |
| 5.3.6 抑制miR-455-5p促进3T3-L1前体脂肪细胞分化 | 第70-71页 |
| 5.3.7 在3T3-L1细胞中测定基因IGF1R表达情况 | 第71页 |
| 5.3.8 Western bloting分析 | 第71-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-74页 |
| 5.4.1 诱导3T3-L1细胞分化 | 第72-73页 |
| 5.4.2 过表达或抑制miR- 455-5p表达 | 第73-74页 |
| 5.5 小结 | 第74-75页 |
| 第六章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第84页 |
