摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
文献综述 | 第12-25页 |
第一章 PLZF及雄性生殖干细胞的研究进展 | 第12-25页 |
1.1 PLZF研究进展 | 第12-18页 |
1.1.1 PLZF与干细胞的自我更新 | 第13-14页 |
1.1.2 PLZF与干细胞分化 | 第14-16页 |
1.1.3 PLZF与细胞周期/凋亡 | 第16页 |
1.1.4 PLZF的基因调控网络 | 第16-18页 |
1.2 雄性生殖干细胞研究进展 | 第18-22页 |
1.2.1 mGSCs的发育分化 | 第19页 |
1.2.2 mGSCs自我更新的调控因素 | 第19-22页 |
1.3 PLZF调控mGSCs的研究进展 | 第22-25页 |
实验部分 | 第25-47页 |
第二章 PLZF超表达与干扰载体的构建及稳转细胞的筛选鉴定 | 第25-37页 |
2.1 材料和仪器 | 第25-27页 |
2.1.1 材料和试剂 | 第25-26页 |
2.1.2 主要仪器和器材 | 第26页 |
2.1.3 主要溶液的配制 | 第26-27页 |
2.2 方法 | 第27-31页 |
2.2.1 PLZF慢病毒超表达载体的构建 | 第27-28页 |
2.2.2 PLZF慢病毒干扰载体的构建 | 第28页 |
2.2.3 细胞转染 | 第28页 |
2.2.4 免疫荧光染色 | 第28页 |
2.2.5 包装病毒 | 第28-29页 |
2.2.6 稳转细胞株的筛选及鉴定 | 第29页 |
2.2.7 RNA提取及反转录 | 第29-30页 |
2.2.8 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第30页 |
2.2.9 蛋白样品的制备 | 第30页 |
2.2.10 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第30页 |
2.2.11 数据分析 | 第30-31页 |
2.3 结果 | 第31-35页 |
2.3.1 筛选pIRES2-EGFP/pPLZF-IRES2-EGFP稳转细胞 | 第31页 |
2.3.2 构建pPLZF-CDH重组质粒和pshPLZF重组质粒 | 第31-33页 |
2.3.3 筛选和鉴定稳转细胞 | 第33-35页 |
2.4 讨论 | 第35-36页 |
2.5 小结 | 第36-37页 |
第三章 PLZF超表达稳转细胞生物学特性的检测 | 第37-47页 |
3.1 材料和仪器 | 第37-38页 |
3.1.1 材料和试剂 | 第37页 |
3.1.2 主要仪器 | 第37页 |
3.1.3 主要溶液的配制 | 第37-38页 |
3.2 方法 | 第38-40页 |
3.2.1 免疫荧光染色 | 第38页 |
3.2.2 RNA提取及反转录 | 第38页 |
3.2.3 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第38页 |
3.2.4 蛋白样品的制备 | 第38页 |
3.2.5 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第38页 |
3.2.6 细胞生长曲线 | 第38页 |
3.2.7 CCK8检测 | 第38-39页 |
3.2.8 EdU染色 | 第39页 |
3.2.9 实验动物的饲养 | 第39页 |
3.2.10 白消安模型鼠的制备 | 第39页 |
3.2.11 细胞移植 | 第39-40页 |
3.2.12 数据分析 | 第40页 |
3.3 结果 | 第40-45页 |
3.3.1 PLZF促进奶山羊mGSCs多能性的维持并抑制其分化 | 第40-41页 |
3.3.2 PLZF与奶山羊mGSCs的DNA甲基化修饰 | 第41-42页 |
3.3.3 PLZF抑制奶山羊mGSCs增殖 | 第42-43页 |
3.3.4 PLZF促进奶山羊mGSCs凋亡 | 第43-44页 |
3.3.5 细胞移植 | 第44-45页 |
3.4 讨论 | 第45-46页 |
3.5 小结 | 第46-47页 |
全文结论 | 第47页 |
创新之处和进一步研究课题 | 第47-48页 |
创新之处 | 第47页 |
进一步研究的课题 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-58页 |
附录 | 第58-62页 |
缩略词 | 第62-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
作者简介 | 第64页 |