| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACTS | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 转基因植物及其研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.1 转基因植物 | 第11页 |
| 1.1.2 转基因植物应用现状 | 第11-12页 |
| 1.2 转基因作物生物安全性评价 | 第12-14页 |
| 1.2.1 转基因作物基因逃逸 | 第12-13页 |
| 1.2.2 转基因作物对非靶标生物的影响 | 第13-14页 |
| 1.2.3 转基因作物对靶标生物的抗性风险 | 第14页 |
| 1.3 Bt杀虫蛋白基因 | 第14-17页 |
| 1.3.1 Bt杀虫蛋白基因的分类 | 第15页 |
| 1.3.2 Bt杀虫蛋白的分子结构 | 第15-16页 |
| 1.3.3 杀虫晶体蛋白的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.4 外源基因在大肠杆菌中高效表达策略 | 第17-20页 |
| 1.4.1 基因改造 | 第17-18页 |
| 1.4.2 表达系统特性对表达的影响 | 第18-19页 |
| 1.4.3 外源基因与系统间的相互作用 | 第19-20页 |
| 1.4.4 培养条件的控制 | 第20页 |
| 1.5 研究总体概述 | 第20-23页 |
| 1.5.1 研究目的意义 | 第20页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第20-23页 |
| 第二章 转基因棉花中外源基因cry1Ac在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究 | 第23-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第24页 |
| 2.1.4 酶、试剂、引物及测序 | 第24页 |
| 2.1.5 常用溶液配置 | 第24页 |
| 2.1.6 SDS-PAGE溶液 | 第24-25页 |
| 2.1.7 纯化缓冲液 | 第25页 |
| 2.1.8 Western blot | 第25-26页 |
| 2.1.9 培养基 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 植物叶片组织基因组DNA小量提取 | 第26页 |
| 2.2.2 基因组DAN的PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶中扩增片段回收 | 第27页 |
| 2.2.4 目的片段与pMD19-T的连接成重组质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第28页 |
| 2.2.6 重组质粒大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| 2.2.7 质粒DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.8 质粒酶切验证 | 第29页 |
| 2.2.9 基因序列测定与cry1Ac人工全基因合成 | 第29页 |
| 2.2.10 cry1Ac融合表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.11 蛋白诱导表达 | 第30页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE检测蛋白表达效果 | 第30-31页 |
| 2.2.13 Cry1Ac蛋白纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.14 Western blot | 第32页 |
| 2.2.15 BCA法测总蛋白含量 | 第32-33页 |
| 2.2.16 ELISA法测定Bt蛋白含量 | 第33页 |
| 2.2.17 棉铃虫幼虫对大肠杆菌中Cry1Ac蛋白敏感性测定 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-43页 |
| 2.3.1 转基因棉花中外源基因cry1Ac(未优化)克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第34-37页 |
| 2.3.2 人工合成基因cry1Ac(优化)克隆及其在大肠杆菌中表达 | 第37-40页 |
| 2.3.3 ELISA定量测定不同载体Cry1Ac蛋白表达量 | 第40-42页 |
| 2.3.4 不同长度Bt基因(Cry1Ab/c和Cry1Ac)在大肠杆菌中表达量 | 第42页 |
| 2.3.5 棉铃虫毒性实验 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-47页 |
| 第三章 转cry1Ac基因拟南芥植株的获得和验证 | 第47-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第47页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第47页 |
| 3.1.3 试剂盒 | 第47-48页 |
| 3.1.4 酶、试剂、引物及测序 | 第48页 |
| 3.1.5 常用溶液配置 | 第48页 |
| 3.1.6 培养基 | 第48页 |
| 3.2 试验方法 | 第48-51页 |
| 3.2.1 cry1Ac基因引物的设计与PCR扩增 | 第48页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶中扩增片段回收 | 第48页 |
| 3.2.3 重组质粒pMD19-cry1Ac_转构建 | 第48页 |
| 3.2.4 重组质粒转化大肠杆菌感受态DH5a | 第48页 |
| 3.2.5 质粒的提取 | 第48页 |
| 3.2.6 质粒酶切验证 | 第48-49页 |
| 3.2.7 质粒连接反应 | 第49页 |
| 3.2.8 cry1Ac转拟南芥融合表达载体构建 | 第49页 |
| 3.2.9 农杆菌感受态细胞制备 | 第49-50页 |
| 3.2.10 重组质粒农杆菌的转化 | 第50页 |
| 3.2.11 拟南芥的种植生长 | 第50页 |
| 3.2.12 菌液侵染拟南芥花序 | 第50-51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-53页 |
| 3.3.1 植物表达载体构建 | 第51-53页 |
| 3.3.2 拟南芥转化植株的筛选与鉴定 | 第53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 全文总结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
