| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第12-21页 |
| 第一章 彩色马蹄莲细菌性软腐病的概述 | 第13-17页 |
| 1 彩色马蹄莲细菌性软腐病 | 第13-14页 |
| 1.1 病原菌以及病害症状 | 第13-14页 |
| 1.2 病原菌的致病过程及条件 | 第14页 |
| 1.3 胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种和黑胫亚种对比简介 | 第14页 |
| 2 致病因子 | 第14-15页 |
| 2.1 胞外水解酶类 | 第15页 |
| 2.2 对寄主活性氧的抵御 | 第15页 |
| 3 致病因子的分泌 | 第15页 |
| 4 致病因子的调控 | 第15-17页 |
| 第二章 微生物(细菌)中的代谢途径 | 第17-21页 |
| 1 EMP途径(Embden-Meyeth of pathway) | 第17页 |
| 2 HMP途径(hexose monophosphate pathway) | 第17页 |
| 3 ED途径(Entner-Doudoroff pathway) | 第17-19页 |
| 4 乙醛酸循环 | 第19-20页 |
| 5 胞内果胶代谢途径 | 第20-21页 |
| 下篇 研究内容 | 第21-65页 |
| 第一章 胡萝卜软腐果胶杆菌中zwf与eda关系分析 | 第23-37页 |
| 1 试验菌株材料 | 第24-26页 |
| 1.1 本研究所用菌株、质粒和引物 | 第24-25页 |
| 1.2 培养基及抗生素 | 第25-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-33页 |
| 2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2 质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.3 PCR反应体系 | 第28页 |
| 2.4 DNA凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.5 DNA酶切、连接 | 第28页 |
| 2.6 大肠杆菌热转感受态细胞的制备及转化 | 第28-29页 |
| 2.7 互补菌株以及空载体对照株的构建 | 第29-30页 |
| 2.8 细菌致病性的测定 | 第30页 |
| 2.9 细菌总RNA的提取及qRT-PCR检测 | 第30-33页 |
| 2.10 zwf和eda共转录PCR验证 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.1 互补菌株以及空载体对照株的构建 | 第33-34页 |
| 3.2 互补菌株的致病性 | 第34-35页 |
| 3.3 PccS1、△zwf(s)和△zwf(d)中zwf以及eda的表达量 | 第35页 |
| 3.4 zwf和eda共转录PCR验证 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第二章 胡萝卜软腐果胶杆菌中eda基因的功能分析 | 第37-55页 |
| 1 试验材料 | 第38-41页 |
| 1.1 本研究所用菌株、质粒和引物 | 第38-40页 |
| 1.2 培养基及抗生素 | 第40-41页 |
| 2 试验方法 | 第41-46页 |
| 2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 2.2 质粒的提取 | 第41页 |
| 2.3 PCR反应体系 | 第41页 |
| 2.4 DNA凝胶电泳及DNA | 第41页 |
| 2.5 DNA的酶切、连接 | 第41页 |
| 2.6 大肠杆菌热转感受态细胞的制备及转化 | 第41页 |
| 2.7 免疫共沉淀(Co-IP)筛选eda互作蛋白 | 第41-43页 |
| 2.8 免疫共沉淀(Co-IP)结果测序 | 第43页 |
| 2.9 酵母双杂一对一验证Eda的互作蛋白 | 第43-44页 |
| 2.10 eda相关基因的缺失突变体构建 | 第44-45页 |
| 2.11 敲除基因互补菌株及空载体对照株的构建 | 第45-46页 |
| 2.12 PccS1(edaf)菌株的构建 | 第46页 |
| 2.13 乙酸钠作为唯一碳源生长的测定 | 第46页 |
| 2.14 致病性测定 | 第46页 |
| 2.15 细菌总RNA的提取及qRT-PCR检测 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-53页 |
| 3.1 eda相关基因的缺失突变体构建 | 第46-47页 |
| 3.2 eda相关基因突变株致病性检测 | 第47-48页 |
| 3.3 eda以及aceA,aceB和aceK突变影响了菌株对乙酸钠的利用 | 第48-49页 |
| 3.4 △eda突变体中IclR,aceK,aceA和aceB基因表达量 | 第49页 |
| 3.5 PccS1(edaflag)菌株验证 | 第49-50页 |
| 3.6 PccS1(edaflag)菌株western blot验证 | 第50-51页 |
| 3.7 Eda蛋白Co-IP结果western blot验证 | 第51页 |
| 3.8 Eda蛋白Co-IP测序结果 | 第51页 |
| 3.9 Eda蛋白Co-IP筛库结果酵母双杂验证 | 第51-52页 |
| 3.10 Aeda突变株在有氧无氧条件下致病性差别 | 第52-53页 |
| 4 讨论与结论 | 第53-55页 |
| 第三章 胡萝卜软腐果胶杆菌中ED途径功能研究 | 第55-65页 |
| 1 试验材料 | 第56-57页 |
| 1.1 本研究所用菌株、质粒和引物 | 第56页 |
| 1.2 培养基及抗生素 | 第56-57页 |
| 2 试验方法 | 第57-59页 |
| 2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第57页 |
| 2.2 质粒的提取 | 第57页 |
| 2.3 PCR反应体系 | 第57页 |
| 2.4 DNA凝胶电泳及DNA | 第57页 |
| 2.5 DNA的酶切、连接 | 第57页 |
| 2.6 大肠杆菌热转感受态细胞的制备及转化 | 第57页 |
| 2.7 △eda(eda~(Pba))菌株的构建 | 第57页 |
| 2.8 PccS1 (edd~(Pba))菌株的构建 | 第57-58页 |
| 2.9 Western blot验证 | 第58页 |
| 2.10 Edd-Eda组合酶活测定 | 第58-59页 |
| 2.11 致病性测定 | 第59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-63页 |
| 3.1 △eda(eda~(Pba))载体酶切验证以及互补菌株验证 | 第59页 |
| 3.2 PccS1 (edd~(Pba))载体酶切验证以及互补菌株验证 | 第59-60页 |
| 3.3 互补菌株PccS1(edd~(Pba))western验证 | 第60-61页 |
| 3.4 Edd-Eda组合酶活测定 | 第61-62页 |
| 3.5 互补菌株致病性检测 | 第62-63页 |
| 4 讨论与结论 | 第63-65页 |
| 全文总结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
