| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-20页 |
| ·Ran蛋白信号通路 | 第15页 |
| ·RanGTPase激活蛋白 | 第15-16页 |
| ·RanGAP蛋白的功能 | 第16-18页 |
| ·RanGAP参与核物质运输的调控 | 第16-17页 |
| ·RanGAP参与纺锤体的组装 | 第17页 |
| ·RanGAP参与核膜的重建 | 第17-18页 |
| ·嗜热四膜虫及Ran蛋白通路 | 第18-19页 |
| ·嗜热四膜虫概述 | 第18页 |
| ·嗜热四膜虫中Ran蛋白通路的研究进展 | 第18-19页 |
| ·本课题的研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 嗜热四膜虫中RanGAP基因的鉴定及其序列分析 | 第20-28页 |
| ·前言 | 第20页 |
| ·材料和试剂 | 第20-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·试剂和工具酶 | 第20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·主要实验仪器 | 第21页 |
| ·主要试剂的制备 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·嗜热四膜虫的培养、饥饿及配对 | 第21-22页 |
| ·嗜热四膜虫全基因组的提取 | 第22页 |
| ·嗜热四膜虫RanGAP基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·嗜热四膜虫总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·嗜热四膜虫中RanGAP基因表达谱的测定 | 第24页 |
| ·RanGAP蛋白序列及聚类分析 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-26页 |
| ·RanGAP基因的克隆和分析 | 第24-25页 |
| ·RanGAP基因的表达谱分析 | 第25页 |
| ·RanGAP蛋白结构及进化分析 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 嗜热四膜虫中RanGAP蛋白的亚细胞定位分析 | 第28-41页 |
| ·前言 | 第28页 |
| ·材料和试剂 | 第28-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·试剂和工具酶 | 第28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-36页 |
| ·pNeo4-HA-GAP载体的构建 | 第30-33页 |
| ·嗜热四膜虫的培养 | 第33页 |
| ·嗜热四膜虫的转化 | 第33-34页 |
| ·HA-RanGAP的同源重组 | 第34页 |
| ·免疫荧光定位 | 第34-35页 |
| ·Western印迹分析方法 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-39页 |
| ·pNeo4-HA-GAP载体的鉴定及重组鉴定 | 第36-37页 |
| ·HA-RanGAP在嗜热四膜虫体内的定位 | 第37-38页 |
| ·RanGAP在亲本大核中的定位 | 第38-39页 |
| ·RanGAP在四膜虫体内的修饰方式 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 RanGAP的异常表达影响大核的无丝分裂 | 第41-51页 |
| ·前言 | 第41页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第41页 |
| ·试剂与工具酶 | 第41页 |
| ·引物 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂的配制 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-43页 |
| ·过表达载体pXS-RanGAP的构建 | 第42页 |
| ·pNeo4-KO-RanGAP敲除载体的构建 | 第42-43页 |
| ·嗜热四膜虫的培养 | 第43页 |
| ·嗜热四膜虫的转化 | 第43页 |
| ·pXS-RanGAP及pNeo4-KO-RanGAP同源重组 | 第43页 |
| ·突变四膜虫株系总RNA的提取 | 第43页 |
| ·RanGAP表达量的测定 | 第43页 |
| ·细胞核染色 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-49页 |
| ·过表达载体pXS-RanGAP的鉴定及重组鉴定 | 第43-44页 |
| ·不同浓度Cd~(2+)诱导RanGAP基因过表达 | 第44-45页 |
| ·过表达RanGAP导致细胞核分裂及胞质缢缩异常 | 第45-46页 |
| ·敲除载体pNeo4-KO-RanGAP以及突变体鉴定 | 第46-47页 |
| ·RanGAP敲减细胞株的转录水平检测 | 第47页 |
| ·RanGAP敲减抑制大核无丝分裂 | 第47-48页 |
| ·RanGAP的异常表达影响RAN及相关调控因子的表达水平 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录Ⅰ | 第56-57页 |
| 附录Ⅱ | 第57-58页 |
| 总结与展望 | 第58-60页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 个人简况及联系方式 | 第62-63页 |
| 承诺书 | 第63-64页 |
