| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| ·金黄色葡萄球菌蛋白A简介 | 第12-13页 |
| ·金黄色葡萄球菌蛋白A的发现 | 第12页 |
| ·蛋白A的理化性质 | 第12-13页 |
| ·蛋白A的免疫学性质 | 第13-15页 |
| ·蛋白A的研究进展与应用 | 第15-20页 |
| ·蛋白A的结构与性质研究 | 第15-16页 |
| ·蛋白A的应用研究 | 第16-20页 |
| ·课题研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-28页 |
| ·实验材料与设备 | 第22-23页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·蛋白含量测定-紫外吸收法 | 第23-24页 |
| ·蛋白含量测定-Bradford法 | 第24-25页 |
| ·蛋白含量测定-凯氏定氮法 | 第25页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳) | 第25-26页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE) | 第26-27页 |
| ·正交试验设计 | 第27-28页 |
| 第三章 金黄色葡萄球菌蛋白A的克隆与表达 | 第28-35页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料与方法 | 第28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-34页 |
| ·金黄色葡萄球菌SPA30基因的克隆 | 第28-32页 |
| ·金黄色葡萄球菌总DNA的提取及PCR扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物的连接、转化及转化子的筛选和鉴定 | 第29页 |
| ·目的基因的测序与比对结果 | 第29-30页 |
| ·金黄色葡萄球菌SPA30基因的表达 | 第30页 |
| ·克隆载体的酶切以及表达载体的制备 | 第30-31页 |
| ·SPA30的转化以及表达鉴定 | 第31页 |
| ·温度对SPA30表达的影响 | 第31-32页 |
| ·不同IPTG浓度对诱导SPA30表达的影响 | 第32页 |
| ·金黄色葡萄球菌SPA25的表达 | 第32-33页 |
| ·金黄色葡萄球菌SPA45的表达 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第四章 金黄色葡萄球菌蛋白A的纯化与性质 | 第35-45页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35页 |
| ·蛋白A对酸耐受性 | 第35页 |
| ·蛋白A对碱耐受性 | 第35页 |
| ·蛋白A温度稳定性 | 第35页 |
| ·蛋白A浓度的确定 | 第35页 |
| ·实验结果与讨论 | 第35-44页 |
| ·蛋白A对酸耐受性 | 第35-38页 |
| ·SPA25对酸耐受性 | 第35-36页 |
| ·SPA30对酸耐受性 | 第36-38页 |
| ·SPA45对酸耐受性 | 第38页 |
| ·蛋白A对碱耐受性 | 第38-41页 |
| ·SPA25对碱耐受性 | 第38-39页 |
| ·SPA30对碱耐受性 | 第39-41页 |
| ·SPA45对碱耐受性 | 第41页 |
| ·蛋白A温度稳定性 | 第41-43页 |
| ·SPA25温度稳定性 | 第42-43页 |
| ·SPA30温度稳定性 | 第43页 |
| ·不同方法测定SPA25浓度 | 第43-44页 |
| ·紫外吸收法测定蛋白浓度 | 第43页 |
| ·灰度扫描法测定蛋白浓度 | 第43-44页 |
| ·凯氏定氮法测定蛋白浓度 | 第44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第五章 金黄色葡萄球菌蛋白A的纯化与生物亲和性研究 | 第45-58页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·实验材料与方法 | 第45-47页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·蛋白纯化材料 | 第45页 |
| ·ELISA检测试剂 | 第45页 |
| ·Dottern检测试剂 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·蛋白样品预处理 | 第46页 |
| ·DEAE-FF离子交换层析 | 第46页 |
| ·镍柱(Ni-NTA)亲和纯化 | 第46页 |
| ·ELISA检测操作 | 第46-47页 |
| ·Dottern检测操作 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-56页 |
| ·离子交换柱DEAE Sepharose FF纯化SPA30 | 第47-54页 |
| ·SPA30的纯化 | 第47-48页 |
| ·SPA25的纯化 | 第48-52页 |
| ·SPA45的纯化 | 第52-54页 |
| ·Ni柱亲和层析纯化SPA30 | 第54-55页 |
| ·SPA与IgG抗体亲和性研究 | 第55-56页 |
| ·ELISA试验检测SPA30与不同IgG抗体的亲和力 | 第55页 |
| ·Dottern实验检测SPA30与不同IgG抗体的亲和力 | 第55-56页 |
| ·Dottern实验检测SPA45和SPA25与不同IgG抗体的亲和力 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第六章 蛋白A的固定化与抗体的纯化 | 第58-65页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·环氧氯丙烷法活化琼脂糖凝胶 | 第58页 |
| ·标准盐酸溶液的标定 | 第58-59页 |
| ·环氧基修饰密度的定量分析 | 第59页 |
| ·配基与活化胶的偶联 | 第59页 |
| ·抗体的纯化 | 第59-60页 |
| ·实验结果与讨论 | 第60-64页 |
| ·正交试验优化琼脂糖凝胶活化因素 | 第60-61页 |
| ·活化胶偶联基团条件 | 第61-62页 |
| ·抗体的纯化 | 第62-64页 |
| ·平衡缓冲液中NaCl浓度对抗体纯化的影响 | 第62-63页 |
| ·洗脱流速对抗体纯化的影响 | 第63页 |
| ·不同条件下偶联胶对抗体纯化的影响 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第七章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
