| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-18页 |
| ·叶酸与一碳单位代谢 | 第10-11页 |
| ·Micro RNAs及其生物学功能 | 第11-14页 |
| ·miRNAs的研究方法 | 第14-15页 |
| ·前期理论和工作基础 | 第15-18页 |
| 第2章 实验材料及方法 | 第18-33页 |
| ·实验材料与试剂 | 第18-21页 |
| ·细胞株 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·主要化学试剂 | 第19-20页 |
| ·无叶酸培养基配制 | 第20-21页 |
| ·培养基设计 | 第20页 |
| ·培养基配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-33页 |
| ·细胞培养 | 第21-22页 |
| ·BJ、HEK293的常规培养 | 第21-22页 |
| ·NCM460的常规培养及干预培养 | 第22页 |
| ·双荧光素酶法验证miR-149靶向MTHFR基因 | 第22-27页 |
| ·重组质粒构建 | 第23-25页 |
| ·突变质粒构建 | 第25页 |
| ·共转染 | 第25-27页 |
| ·MTHFR mRNA水平和miR-149表达水平测定 | 第27-32页 |
| ·总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·MTHFR mRNA水平测定 | 第28-30页 |
| ·miR-149表达水平测定 | 第30-32页 |
| ·实验结果分析方法 | 第32-33页 |
| 第3章 实验结果 | 第33-40页 |
| ·双荧光素酶验证结果分析 | 第33-35页 |
| ·MTHFR 3’UTR野生型质粒构建结果 | 第33-34页 |
| ·MTHFR 3’UTR野生型PCR产物分析 | 第33页 |
| ·MTHFR 3’UTR野生型质粒酶切鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·MTHFR 3’UTR野生型质粒测序结果 | 第34页 |
| ·MTHFR 3’UTR突变型质粒构建结果 | 第34页 |
| ·双荧光素酶验证结果 | 第34-35页 |
| ·RT-qPCR结果分析 | 第35-40页 |
| ·总RNA质检结果 | 第35页 |
| ·MTHFR RT-qPCR结果 | 第35-37页 |
| ·样本基因的扩增曲线结果 | 第35-36页 |
| ·样本基因的熔解曲线结果 | 第36-37页 |
| ·MTHFR mRNA水平分析 | 第37页 |
| ·miR-149 RT-qPCR结果 | 第37-40页 |
| ·miRNA的扩增曲线结果 | 第37-38页 |
| ·miRNA的熔解曲线结果 | 第38-39页 |
| ·miR-149表达结果分析 | 第39-40页 |
| 第4章 讨论 | 第40-44页 |
| ·叶酸及遗传变异对一碳单位代谢的影响 | 第40-41页 |
| ·miRNAs对一碳单位代谢的影响 | 第41-42页 |
| ·miR-149在人不同细胞系中的表达调控 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录A 自配试剂和溶液配方 | 第49-54页 |
| 附录B 野生型重组质粒测序结果 | 第54-55页 |
| 附录C 文献综述 | 第55-66页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 攻读学位期间完成的学术论文和研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |