| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·芍药是世界上主要流行的切花之一 | 第11页 |
| ·乙烯与切花衰老 | 第11-12页 |
| ·乙烯的生物合成 | 第12-14页 |
| ·乙烯代谢关键基因 | 第14-16页 |
| ·ACO 基因 | 第14-15页 |
| ·ACS 基因 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌原核表达系统 | 第16-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌系统中表达因素 | 第17-18页 |
| ·pET 表达系统 | 第18-19页 |
| ·包涵体 | 第19页 |
| ·研究的目的、意义及研究内容和技术路线 | 第19-23页 |
| ·研究的目的、意义 | 第19-20页 |
| ·研究内容 | 第20页 |
| ·技术路线 | 第20-23页 |
| 第2章 芍药 ACO 基因原核表达载体 pET-32a-ACO 构建及表达 | 第23-47页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第23-26页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·菌株和质粒 | 第23-24页 |
| ·主要试剂及配置方法 | 第24-26页 |
| ·方法 | 第26-32页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第26页 |
| ·质粒提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·DNA 片段的回收、连接转化及鉴定 | 第27-29页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白凝胶电泳 | 第29页 |
| ·IPTG 诱导表达芍药 ACO 重组蛋白 | 第29-30页 |
| ·IPTG 浓度对芍药 ACO 重组蛋白表达量的影响 | 第30页 |
| ·诱导起始菌密度对芍药 ACO 重组蛋白表达量的影响 | 第30页 |
| ·不同诱导时间对芍药 ACO 重组蛋白表达量的影响 | 第30页 |
| ·不同温度下重组芍药 ACO 蛋白的表达形式 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌菌体裂解 | 第31页 |
| ·ACO 酶活性检测 | 第31页 |
| ·金属螯合亲和层析纯化芍药 ACO 蛋白 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-47页 |
| ·芍药 ACO 基因 RT-PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·芍药 ACO 基因的鉴定 | 第33-34页 |
| ·芍药 ACO 基因的序列测序 | 第34-35页 |
| ·芍药 ACO 基因和载体酶切、回收 | 第35页 |
| ·pET-32a-ACO 原核表达载体的鉴定 | 第35-37页 |
| ·芍药 pET-32a-ACO 原核表达载体转化大肠杆菌 BL21（DE3）及筛选 | 第37页 |
| ·芍药 ACO 的原核表达 | 第37-38页 |
| ·IPTG 浓度对芍药 ACO 重组蛋白表达量的影响 | 第38-39页 |
| ·诱导起始菌体密度对芍药 ACO 重组蛋白表达量的影响 | 第39-40页 |
| ·不同诱导时间对芍药 ACO 重组蛋白表达量的影响 | 第40-41页 |
| ·不同温度下重组芍药 ACO 蛋白的表达形式 | 第41-43页 |
| ·ACO 酶活性检测 | 第43-45页 |
| ·金属螯合亲和层析纯化芍药 ACO 蛋白 | 第45-47页 |
| 第3章 芍药 ACO 基因原核表达载体 pQE31-ACO 构建及表达 | 第47-59页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第47页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·仪器 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·主要试剂及配置方法 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-50页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第48页 |
| ·质粒提取 | 第48页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第48页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·DNA 片段的回收、连接转化及鉴定 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白凝胶电泳 | 第49页 |
| ·IPTG 诱导表达芍药 ACO 重组蛋白 | 第49页 |
| ·重组芍药 ACO 蛋白的可溶性表达 | 第49-50页 |
| ·大肠杆菌菌体裂解 | 第50页 |
| ·ACO 酶活性检测 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-59页 |
| ·芍药 ACO 基因 RT-PCR 扩增 | 第50-51页 |
| ·芍药 ACO 基因的鉴定 | 第51-52页 |
| ·芍药 ACO 基因的序列测序 | 第52-53页 |
| ·PQE31-ACO 原核表达载体的鉴定 | 第53-54页 |
| ·芍药 pQE31-ACO 原核表达载体转化大肠杆菌 M15 及筛选 | 第54-55页 |
| ·芍药 ACO 的原核表达 | 第55-56页 |
| ·25℃诱导表达重组芍药 ACO 可溶性蛋白 | 第56页 |
| ·ACO 酶活性检测 | 第56-59页 |
| 第4章 芍药 ACS 基因原核表达载体 pET-32a-ACS 构建及表达 | 第59-73页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第59页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·仪器 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·菌株和质粒 | 第59页 |
| ·主要试剂及配置方法 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-62页 |
| ·引物设计 | 第59-60页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第60页 |
| ·质粒提取 | 第60页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第60页 |
| ·DNA 片段的回收、连接转化及鉴定 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白凝胶电泳 | 第61页 |
| ·IPTG 诱导表达芍药 ACS 蛋白 | 第61页 |
| ·IPTG 浓度对芍药 ACS 重组蛋白表达量的影响 | 第61页 |
| ·诱导起始菌体密度对芍药 ACS 重组蛋白表达量的影响 | 第61-62页 |
| ·不同诱导时间对芍药 ACS 重组蛋白表达量的影响 | 第62页 |
| ·重组芍药 ACS 蛋白的表达形式 | 第62页 |
| ·大肠杆菌菌体裂解 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-73页 |
| ·芍药 ACS 基因的序列测序 | 第62-64页 |
| ·芍药 ACS 基因和载体酶切、回收 | 第64-65页 |
| ·pET-32a-ACS 原核表达载体的鉴定 | 第65-66页 |
| ·芍药 pET-32a-ACS 原核表达载体转化大肠杆菌 BL21（DE3）及筛选 | 第66-67页 |
| ·芍药 ACS 的原核表达 | 第67-68页 |
| ·IPTG 浓度对芍药 ACS 重组蛋白表达量的影响 | 第68页 |
| ·诱导起始菌体密度对芍药 ACS 重组蛋白表达量的影响 | 第68-69页 |
| ·不同诱导时间对芍药 ACS 重组蛋白表达量的影响 | 第69-70页 |
| ·重组芍药 ACS 蛋白的表达形式 | 第70-73页 |
| 第5章 芍药 ACS 基因原核表达载体 pQE31-ACS 构建及表达 | 第73-82页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第73页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·仪器 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·菌株和质粒 | 第73页 |
| ·主要试剂及配置方法 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·引物设计 | 第73页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第73-74页 |
| ·质粒提取 | 第74页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第74页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第74页 |
| ·DNA 片段的回收、连接转化及鉴定 | 第74-75页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白凝胶电泳 | 第75页 |
| ·IPTG 诱导表达芍药 ACS 重组蛋白 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-82页 |
| ·芍药 ACS 基因 RT-PCR 扩增 | 第75-76页 |
| ·芍药 ACS 基因的鉴定 | 第76-77页 |
| ·芍药 ACS 基因的序列测序 | 第77-78页 |
| ·pQE31-ACS 原核表达载体的鉴定 | 第78-80页 |
| ·pQE31-ACS 原核表达载体转化大肠杆菌 M15 及筛选 | 第80页 |
| ·芍药 ACS 的原核表达 | 第80-82页 |
| 第6章 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 缩略语词汇表 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第96页 |
