| 第一部分 透皮肽TD-1作用机理的研究 | 第1-69页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-31页 |
| ·透皮给药的概述 | 第13-21页 |
| ·皮肤的功能与结构 | 第13-14页 |
| ·透皮给药的定义与优势 | 第14-15页 |
| ·透皮给药的影响因素 | 第15页 |
| ·透皮给药的辅助方法及相应透皮机理 | 第15-21页 |
| ·化学促透方式及其机理 | 第17-18页 |
| ·物理促透方式及其机理 | 第18-19页 |
| ·新型肽伴侣透皮给药 | 第19-21页 |
| ·钠钾ATP酶(Na~+/K~+-ATPase)与钠钾ATP酶β亚基(ATP1B1) | 第21-24页 |
| ·钠钾ATP酶(Na~+/K~+-ATPase) | 第21-23页 |
| ·钠钾ATP酶所属家族 | 第21页 |
| ·钠钾ATP酶的组成 | 第21-22页 |
| ·钠钾ATP酶的工作原理 | 第22-23页 |
| ·钠钾ATP酶β亚基 | 第23-24页 |
| ·ATP1B1基因的结构 | 第23页 |
| ·ATP1B1基因的功能 | 第23-24页 |
| ·蛋白质相互作用的研究技术方法 | 第24-31页 |
| ·酵母双杂交技术(yeast two hybrid) | 第24-25页 |
| ·荧光蛋白融合技术、免疫荧光技术与激光共聚焦扫描显微术 | 第25-26页 |
| ·GST pull-down技术 | 第26页 |
| ·免疫共沉淀技术(co-immunoprecipitation) | 第26-27页 |
| ·串联亲和纯化技术(TAP) | 第27-28页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第28-29页 |
| ·等温滴定量热技术 | 第29页 |
| ·荧光能量共振转移显微成像技术(FRET) | 第29-31页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第31-45页 |
| ·实验材料 | 第31-35页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第31页 |
| ·实验对象 | 第31-33页 |
| ·质粒、菌株与文库 | 第32页 |
| ·细胞与实验动物 | 第32-33页 |
| ·重要试剂 | 第33-34页 |
| ·分子生物学相关试剂 | 第33页 |
| ·TD-1及类似肽 | 第33页 |
| ·细胞培养和分离试剂 | 第33-34页 |
| ·抗体及纯化试剂 | 第34页 |
| ·引物、测序和试剂盒 | 第34页 |
| ·常用试剂 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-45页 |
| ·基本分子生物学实验 | 第35-36页 |
| ·PCR 反应 | 第35-36页 |
| ·小量质粒DNA抽提 | 第36页 |
| ·质粒酶切连接 | 第36页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第36页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第36-38页 |
| ·一步法转化酵母 | 第37页 |
| ·酵母接合筛库实验 | 第37页 |
| ·酵母双杂交报告基因筛选 | 第37-38页 |
| ·酵母质粒DNA的抽提(质粒营救) | 第38页 |
| ·GST融合蛋白的表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·GST蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·pull-down | 第39页 |
| ·酶联免疫法、免疫印迹、免疫共沉淀、免疫荧光 | 第39-41页 |
| ·酶联免疫法 | 第39-40页 |
| ·免疫印迹 | 第40页 |
| ·免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| ·免疫荧光 | 第41页 |
| ·细胞培养、细胞转染及流式细胞分析 | 第41-42页 |
| ·细胞培养 | 第41页 |
| ·细胞转染 | 第41-42页 |
| ·细胞流式分析 | 第42页 |
| ·皮肤切片相关实验 | 第42-43页 |
| ·皮肤处理 | 第42页 |
| ·表皮层与真皮层的分离 | 第42-43页 |
| ·冰冻切片 | 第43页 |
| ·噬菌体体外透皮实验 | 第43-44页 |
| ·Ecoli ER2738宿主菌的活化培养 | 第43页 |
| ·噬菌体扩增 | 第43-44页 |
| ·噬菌体滴度测定 | 第44页 |
| ·噬菌体体内透皮实验 | 第44页 |
| ·噬菌体体外透皮实验 | 第44页 |
| ·ATP酶的活性测试 | 第44-45页 |
| 第3章 实验过程与结果 | 第45-62页 |
| ·酵母双杂交实验筛选TD-1相互作用的蛋白 | 第45-50页 |
| ·诱饵质粒构建和诱饵在酵母中的活性检测 | 第45-47页 |
| ·文库质量分析及文库筛选 | 第47-49页 |
| ·回转验证 | 第49-50页 |
| ·筛库结果分析 | 第50页 |
| ·TD-1与ATP1B1在HeLa细胞中的定位 | 第50-52页 |
| ·蛋白ATP1B1与TD-1的特异性直接结合 | 第52-55页 |
| ·ATP1B1基因的克隆及表达纯化 | 第52页 |
| ·外源表达GST-ATP1B1融合蛋白能与透皮肽TD-1直接结合 | 第52-53页 |
| ·TD-1与ATP1B1胞外区C端的体外结合 | 第53-54页 |
| ·TD-1与ATP1B1c的结合具有浓度效应 | 第54页 |
| ·TD-1与ATP1B1c的结合具有序列特异性 | 第54-55页 |
| ·co-IP实验证实TD-1与内源性ATP1B1蛋白发生相互作用结合 | 第55-56页 |
| ·透皮肽TD-1对钠钾ATP酶β亚基(ATP1B1)的多方面影响 | 第56-59页 |
| ·透皮肽TD-1对不同细胞中ATP1B1表达水平的影响 | 第56-57页 |
| ·透皮肽TD-1对于ATP1B1在皮肤角质形成细胞中定位的影响 | 第57页 |
| ·TD-1对皮肤切片中ATP1B1的影响 | 第57-58页 |
| ·TD-1对钠钾ATP酶全酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·TD-1对细胞Dox抗性的影响 | 第59页 |
| ·能量对PH-1噬菌体自身体外透皮的影响 | 第59-60页 |
| ·TD-1与皮肤细胞的特异结合 | 第60-62页 |
| 第4章 讨论与分析 | 第62-69页 |
| ·酵母双杂交筛库的实验分析 | 第62-63页 |
| ·TD-1与ATP1B1的结合实验的讨论 | 第63-64页 |
| ·TD-1与ATP1B1这对互作蛋白的相互影响 | 第64-65页 |
| ·TD-1与ATPlB1这对互作蛋白在透皮中的可能作用 | 第65-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第二部分 细胞自噬相关的初步研究 | 第69-103页 |
| 摘要 | 第69-70页 |
| ABSTRACT | 第70-71页 |
| 第5章 文献综述 | 第71-84页 |
| ·细胞自噬 | 第71-77页 |
| ·细胞自噬的发现与定义 | 第71页 |
| ·细胞自噬的分类 | 第71-72页 |
| ·细胞自噬的分子机制 | 第72-74页 |
| ·细胞自噬的上游调节 | 第72-74页 |
| ·细胞自噬发生过程 | 第74页 |
| ·细胞自噬的检测方法 | 第74-75页 |
| ·细胞自噬的生物学功能 | 第75-76页 |
| ·细胞自噬与肿瘤发生 | 第75页 |
| ·细胞自噬与神经退行性疾病 | 第75页 |
| ·细胞自噬与病原体感染及免疫系统应答 | 第75-76页 |
| ·细胞自噬与细胞的分化和衰老 | 第76页 |
| ·自噬研究的先行者 | 第76-77页 |
| ·细胞自噬的相关基因 | 第77-80页 |
| ·Atg5(Apg5) | 第78-79页 |
| ·BECN1(Atg6) | 第79页 |
| ·DRAM | 第79-80页 |
| ·引发自噬的纳米材料 | 第80-82页 |
| ·稀土金属氧化物 | 第80-81页 |
| ·量子点((quantum dot) | 第81页 |
| ·富勒烯(C60)及衍生物 | 第81-82页 |
| ·树状大分子(PAMAM) | 第82页 |
| ·阳离子脂质体 | 第82页 |
| ·引起自噬的小分子 | 第82-83页 |
| ·雷帕霉素(Rapamycin) | 第83页 |
| ·海藻糖 | 第83页 |
| ·锂盐 | 第83页 |
| ·PDMAEMA材料 | 第83-84页 |
| 第6章 材料与方法 | 第84-91页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·质粒、菌株、文库与细胞 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-91页 |
| ·基本分子生物学实验 | 第85-86页 |
| ·PCR反应 | 第85页 |
| ·小量质粒DNA抽提 | 第85-86页 |
| ·质粒酶切连接 | 第86页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第86页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第86-88页 |
| ·一步法转化酵母 | 第86页 |
| ·酵母接合筛库实验 | 第86-87页 |
| ·酵母双杂交报告基因筛选 | 第87页 |
| ·酵母质粒DNA的抽提(质粒营救) | 第87-88页 |
| ·细胞培养、细胞转染、细胞毒性分析、免疫印迹 | 第88-89页 |
| ·细胞培养 | 第88页 |
| ·细胞转染 | 第88页 |
| ·细胞毒性分析(MTT实验) | 第88-89页 |
| ·免疫印迹 | 第89页 |
| ·PEO-PDMAEMA-(MAH-β-CD)合成实验 | 第89-91页 |
| ·S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α"-乙酸)三硫代碳酸酯的合成 | 第89-90页 |
| ·PEO大分子RAFT试剂(PEO-RAFT)的合成 | 第90页 |
| ·PEO-PDMAEMA的合成 | 第90页 |
| ·MAH-β-CD的合成 | 第90页 |
| ·PEO-PDMAEMA-(MAH-β-CD)共聚物的合成 | 第90-91页 |
| 第7章 结果与讨论1—自噬蛋白Atg5、Becn1、DRAM的相互作用蛋白 | 第91-98页 |
| ·利用酵母双杂交技术寻找新的与Atg5、Becn1、DRAM相互作用的蛋白 | 第91-94页 |
| ·诱饵质粒的构建、酵母转化和诱饵毒性、自激活检测 | 第91-92页 |
| ·文库质量分析及文库筛选 | 第92-94页 |
| ·筛库结果分析 | 第94页 |
| ·细胞共定位研究DRAM及与之相互作用的蛋白 | 第94-97页 |
| ·DRAM和LC3在HeLa细胞中的共定位 | 第95页 |
| ·DRAM和Rab基因家族在HeLa细胞中的共定位 | 第95-96页 |
| ·DRAM和Rab基因家族在MEF-WT和MEF-KO细胞中的共定位 | 第96-97页 |
| ·小结 | 第97-98页 |
| 第8章 结果与讨论2—PDMAEMA材料引起细胞自噬 | 第98-103页 |
| ·PDMAEMA材料的合成与表征 | 第98-99页 |
| ·PDMAEMA材料的毒性 | 第99-101页 |
| ·PEO-PDMAEMA材料的毒性 | 第99-100页 |
| ·PEO-PDMAEMA-CD材料的毒性 | 第100-101页 |
| ·PDMAEMA材料与细胞自噬 | 第101-102页 |
| ·PDMAEMA材料与细胞转染 | 第102页 |
| ·小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-109页 |
| 附录1 常用缩略词 | 第109-111页 |
| 附录2 酵母双杂交实验流程图 | 第111-112页 |
| 附录3 攻读博士期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第112-113页 |
| 附录4 参加的学术会议 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
