| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 缩略语表 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-24页 |
| ·喹赛多的研究进展 | 第18-19页 |
| ·GH转录,合成和分泌的研究进展 | 第19-22页 |
| ·本课题研究技术 | 第22-23页 |
| ·研究内容和目标 | 第23-24页 |
| 2 材料方法 | 第24-51页 |
| ·细胞株 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·细胞培养及冻存 | 第28-29页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·细胞处理 | 第29页 |
| ·RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·RNA浓度测定及质量检测 | 第30页 |
| ·cDNA的合成 | 第30-31页 |
| ·实时荧光定量PCR方法检测GHmRNA表达水平的变化 | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系 | 第31-32页 |
| ·实时荧光定量PCR数据分析 | 第32页 |
| ·统计学分析 | 第32页 |
| ·ELISA方法检测GH分泌量的变化 | 第32-33页 |
| ·待测样品准备 | 第32页 |
| ·GH分泌量测定步骤 | 第32-33页 |
| ·结果计算 | 第33页 |
| ·BCA法检测细胞内总蛋白含量 | 第33页 |
| ·Western Blot方法检测GH蛋白表达情况 | 第33-36页 |
| ·细胞处理 | 第33-34页 |
| ·细胞蛋白提取及浓度测定 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·转膜 | 第35页 |
| ·封闭 | 第35页 |
| ·一抗孵育 | 第35页 |
| ·二抗孵育 | 第35页 |
| ·化学发光显色 | 第35-36页 |
| ·喹赛多对GH3细胞影响的基因表达谱检测 | 第36-40页 |
| ·总RNA的提取和纯化 | 第36-37页 |
| ·cDNA的合成和纯化 | 第37-38页 |
| ·IVT合成cRNA和cRNA的纯化 | 第38-39页 |
| ·cRNA片段化 | 第39-40页 |
| ·芯片杂交 | 第40页 |
| ·芯片洗脱 | 第40页 |
| ·芯片扫描 | 第40页 |
| ·实时荧光定量PCR验证基因芯片中差异基因的mRNA表达 | 第40-42页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系 | 第41-42页 |
| ·实时荧光定量PCR数据分析 | 第42页 |
| ·统计学分析 | 第42页 |
| ·双向电泳技术检测GH3细胞差异蛋白质组学研究 | 第42-47页 |
| ·细胞处理及分组 | 第43页 |
| ·细胞总蛋白的制备 | 第43页 |
| ·蛋白质定量 | 第43-44页 |
| ·蛋白质水化上样 | 第44页 |
| ·一相等点聚焦(IEF) | 第44-45页 |
| ·IPG胶条平衡 | 第45页 |
| ·二相SDS-PAGE电泳 | 第45-46页 |
| ·染色 | 第46页 |
| ·图像扫描及分析 | 第46-47页 |
| ·蛋白质质谱鉴定 | 第47-49页 |
| ·胶内酶解 | 第47-48页 |
| ·MALDI-TOF质谱分析及数据库搜索 | 第48-49页 |
| ·Western Blot方法验证差异蛋白的表达情况 | 第49-51页 |
| ·细胞处理 | 第49页 |
| ·细胞蛋白提取及浓度测定 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第49-50页 |
| ·转膜 | 第50页 |
| ·封闭 | 第50页 |
| ·一抗孵育 | 第50页 |
| ·二抗孵育 | 第50页 |
| ·化学发光显色 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-76页 |
| ·GH3细胞培养 | 第51页 |
| ·RNA浓度的测定及质量检测 | 第51-52页 |
| ·RNA浓度测定 | 第51-52页 |
| ·RNA质量的检测 | 第52页 |
| ·喹赛多作用于GH3细胞GHmRNA表达水平的变化 | 第52-54页 |
| ·溶解曲线和标准曲线 | 第52-53页 |
| ·喹赛多作用于GH3细胞GHmRNA表达水平的变化 | 第53页 |
| ·PCR产物的验证 | 第53-54页 |
| ·ELISA方法检测喹赛多作用下GH3细胞中GH分泌量的变化 | 第54-55页 |
| ·ELISA方法检测GH分泌量的标准曲线 | 第54页 |
| ·喹赛多作用于GH3细胞GH分泌量的变化 | 第54-55页 |
| ·喹赛多作用于GH3细胞总蛋白的变化 | 第55-56页 |
| ·Western blot检测GH蛋白的表达水平 | 第56页 |
| ·基因芯片显示的差异基因分析 | 第56-64页 |
| ·Real-time PCR验证基因芯片中部分差异基因的mRNA表达 | 第64-67页 |
| ·相关基因定量溶解曲线和标准曲线 | 第64-66页 |
| ·荧光定量PCR验证基因与芯片结果对比情况 | 第66-67页 |
| ·双向电泳寻找喹赛多作用GH3细胞后差异表达蛋白结果 | 第67-76页 |
| ·蛋白质定量 | 第67页 |
| ·喹赛多对GH3细胞差异蛋白质组学分析 | 第67-69页 |
| ·差异蛋白点质谱鉴定结果 | 第69-75页 |
| ·Western blot验证基因芯片和双向电泳结果 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-98页 |
| ·喹赛多对GH3细胞作用差异基因的分析 | 第76-79页 |
| ·喹赛多孵育GH3细胞1h差异表达的基因 | 第76-77页 |
| ·喹赛多孵育GH3细胞12h差异表达的基因 | 第77-79页 |
| ·差异基因的功能分析 | 第79-84页 |
| ·细胞内信号转导相关基因 | 第79-81页 |
| ·调节物质能量代谢相关基因 | 第81-83页 |
| ·离子转运相关基因 | 第83-84页 |
| ·喹赛多对GH3细胞作用差异蛋白的分析 | 第84-87页 |
| ·喹赛多对GH3细胞作用差异蛋白功能分析 | 第87-89页 |
| ·分子伴侣 | 第87页 |
| ·细胞转运蛋白 | 第87-88页 |
| ·蛋白激酶因子 | 第88页 |
| ·维持细胞形态相关蛋白 | 第88-89页 |
| ·物质代谢与能量代谢 | 第89页 |
| ·基因芯片及双向电泳结果之间的关系 | 第89-91页 |
| ·喹赛多影响GH3细胞GH合成和分泌的分子机理 | 第91-98页 |
| 5 全文总结 | 第98-100页 |
| 6 文献综述：药物基因组和蛋白质组研究进展 | 第100-112页 |
| 1 药物基因组学研究进展 | 第100-105页 |
| ·药物基因组学发展简史 | 第100-101页 |
| ·药物基因组概念与基本原理 | 第101页 |
| ·药物基因组的主要研究方法 | 第101-103页 |
| ·表型和基因型分析 | 第101-102页 |
| ·药物效应图谱 | 第102页 |
| ·连锁分析及关联分析 | 第102页 |
| ·单核苷酸多态性 | 第102页 |
| ·基因芯片技术 | 第102页 |
| ·基因表达连续分析 | 第102-103页 |
| ·药物基因组的研究现状 | 第103-105页 |
| ·寻找新药靶 | 第103-104页 |
| ·加速新药研发 | 第104页 |
| ·指导临床合理用药 | 第104-105页 |
| ·药物基因组的发展前景 | 第105页 |
| 2 药物蛋白质组的研究进展 | 第105-112页 |
| ·药物蛋白质组的发展简史 | 第105-106页 |
| ·药物蛋白质组的概念与基本原理 | 第106页 |
| ·药物蛋白质组的主要研究方法 | 第106-109页 |
| ·双向电泳与质谱联用 | 第106-107页 |
| ·液相色谱(LC)分离配合质谱(MS)鉴定 | 第107页 |
| ·生物质谱技术 | 第107页 |
| ·生物传感芯片质谱技术 | 第107-108页 |
| ·同位素标记亲和标签技术(ICAT) | 第108页 |
| ·蛋白质芯片 | 第108页 |
| ·酵母双杂交系统和其他技术 | 第108-109页 |
| ·药物蛋白质组的研究现状 | 第109-110页 |
| ·药物靶点的发现 | 第109页 |
| ·阐明药物作用机制 | 第109-110页 |
| ·药物的筛选和新药发现 | 第110页 |
| ·药物蛋白质组的发展前景 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 作者简介 | 第130-131页 |
| 附录 | 第131-150页 |
