| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| ·棉纤维的发育 | 第10-13页 |
| ·起始期 | 第11页 |
| ·伸长期 | 第11-12页 |
| ·次生壁增厚期 | 第12-13页 |
| ·成熟期 | 第13页 |
| ·棉纤维次生壁加厚期相关基因的研究 | 第13-14页 |
| ·果胶甲酯酶的研究进展 | 第14-19页 |
| ·果胶 | 第14-16页 |
| ·果胶甲酯酶 | 第16-19页 |
| ·果胶甲酷雜(PME)的结构特征 | 第17-19页 |
| ·PME的酶活特性 | 第19页 |
| ·基因克隆技术 | 第19-23页 |
| ·RACE技术 | 第20页 |
| ·抑制性消减杂交技术 | 第20-21页 |
| ·Gateway克隆技术 | 第21页 |
| ·In-Fusion克隆技术 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2、材料与方法 | 第24-43页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·取材 | 第24页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·载体质粒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·培养基及常用溶液 | 第25页 |
| ·果胶甲酯酶基因的克隆 | 第25-34页 |
| ·果胶甲酯酶基因来源 | 第25-26页 |
| ·基因组DNA及总RNA的提取与质量检测 | 第26-27页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第27-28页 |
| ·RACE扩增 | 第28-30页 |
| ·目的片段的T-A克隆 | 第30-33页 |
| ·基因结构分析 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第34-35页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR反应程序及体系 | 第34-35页 |
| ·原核表达载体的构建及目的蛋白的纯化 | 第35-40页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·载体pET-30a和PCR产物的双酶切 | 第36页 |
| ·目的片段与载体的连接与鉴定 | 第36-37页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第37页 |
| ·BL21-Gold(DE3)感受态细胞的转化及筛选 | 第37页 |
| ·GhPME6原核蛋白的诱导表达 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白的Western Blot鉴定 | 第39页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第39-40页 |
| ·真核表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第40-43页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·农杆菌的制备与转化 | 第41-42页 |
| ·花序浸染法转化拟南芥 | 第42页 |
| ·转基因拟南芥的检测 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-56页 |
| ·ESTs筛选结果分析 | 第43-44页 |
| ·PME6基因全长序列的克隆 | 第44-47页 |
| ·总RNA提取 | 第44-45页 |
| ·GhPME6基因全长序列的克隆 | 第45-46页 |
| ·PME6基因组序列在不同棉属中的比对分析 | 第46-47页 |
| ·PME6蛋白在不同物种中的同源比对及进化树分析 | 第47-50页 |
| ·GhPME6的时空表达特征分析 | 第50-51页 |
| ·GhPME6原核表达载体的构建和融合蛋白表达 | 第51-54页 |
| ·GhPME6原核表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·GhPME6融合蛋白表达 | 第52-53页 |
| ·Western blot检测 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第54页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·拟南芥的遗传转化与鉴定 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-61页 |
| ·In-Fusion技术的优越性 | 第56页 |
| ·GhPME6的原核表达 | 第56-57页 |
| ·不同棉属基因组的亲缘关系 | 第57-58页 |
| ·果胶甲酯酶基因家族 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 附录 | 第71-76页 |
| 作者简介 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |