| 附表 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 图表目录 | 第12-14页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-28页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第15-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白 | 第16-19页 |
| ·杀虫晶体蛋白的分类 | 第16-17页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构及功能的关系 | 第17-18页 |
| ·杀虫晶体蛋白的作用机制 | 第18-19页 |
| ·营养期杀虫蛋白 | 第19-23页 |
| ·Vip1/Vip2 蛋白 | 第21页 |
| ·Vip3 蛋白 | 第21-23页 |
| ·杀虫基因的鉴定方法 | 第23-26页 |
| ·保守引物 PCR | 第23-24页 |
| ·多重 PCR | 第24页 |
| ·PCR-RFLP | 第24页 |
| ·两步 PCR | 第24-25页 |
| ·PCR-HRM | 第25页 |
| ·DNA 分子杂交 | 第25页 |
| ·基因组测序 | 第25页 |
| ·杀虫蛋白鉴定 | 第25-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的应用 | 第26-27页 |
| ·Bt 杀虫剂 | 第26页 |
| ·Bt 转基因作物 | 第26-27页 |
| ·本研究的立题依据与目的意义 | 第27-28页 |
| 第二章 vip3A 基因的克隆、表达与活性测定 | 第28-46页 |
| ·实验材料与试剂 | 第28-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·抗生素 | 第29页 |
| ·酶与生化试剂 | 第29页 |
| ·常用溶液与缓冲液 | 第29-30页 |
| ·供试昆虫 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·Bt 基因组库的构建 | 第31页 |
| ·PCR 引物设计 | 第31-32页 |
| ·Phusion 超保真 DNA 聚合酶 PCR 反应体系 | 第32页 |
| ·pEB 载体酶切体系 | 第32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·连接反应 | 第32-33页 |
| ·E. coli 感受态制备 | 第33页 |
| ·E. coli 的热激转化 | 第33页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第33页 |
| ·PCR-RFLP 鉴定 vip3A 基因型 | 第33-34页 |
| ·vip3A 新基因在 E .coli 的诱导表达 | 第34页 |
| ·Vip3A 蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第34页 |
| ·生物活性测定 | 第34-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-44页 |
| ·Bt 基因组库的构建 | 第37页 |
| ·vip3A 新基因的扩增、克隆及表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·PCR-RFLP 分析 vip3A 新基因 | 第38-40页 |
| ·vip3A 新基因的序列分析 | 第40页 |
| ·Vip3A 蛋白的相似性比较 | 第40-41页 |
| ·Vip3A 蛋白的异源诱导表达 | 第41-43页 |
| ·Vip3A 蛋白的杀虫生物活性测定 | 第43页 |
| ·Vip3Ag 蛋白的氨基酸序列比较 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 Vip3Aa 蛋白活性区域的研究 | 第46-59页 |
| ·实验材料与试剂 | 第46-47页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·抗生素 | 第46页 |
| ·生化试剂 | 第46页 |
| ·常用溶液与缓冲液 | 第46-47页 |
| ·供试昆虫 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·大肠杆菌中 Vip3Aa 蛋白的诱导表达 | 第47页 |
| ·亲和层析纯化 | 第47-48页 |
| ·Vip3Aa 纯蛋白的透析 | 第48页 |
| ·Vip3Aa 蛋白活化条件的优化 | 第48页 |
| ·甜菜夜蛾的生物活性测定 | 第48页 |
| ·Vip3Aa 活化蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·Vip3Aa 活化蛋白的肽指纹图谱分析 | 第49页 |
| ·Vip3Aa 活化蛋白的酶切位点检测 | 第49页 |
| ·Vip3Aa 活化蛋白 N 端测序方法 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-57页 |
| ·Vip3Aa 蛋白的纯化条件的优化 | 第49-51页 |
| ·Vip3Aa 蛋白的活化分析 | 第51-53页 |
| ·甜菜夜蛾的生物活性测定 | 第53页 |
| ·Vip3Aa 活化蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·N 端测序 | 第54-56页 |
| ·肽指纹图谱和酶切位点分析结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第四章 全文结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |