| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 引言 | 第14-21页 |
| 第一部分 IFN-λ的基因克隆 | 第21-34页 |
| 1 实验材料 | 第21-24页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要试剂配制 | 第21-23页 |
| ·仪器与设备 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-30页 |
| ·PCR 扩增 IFN-λ3 基因 | 第24-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第24-25页 |
| ·胶回收纯化目的基因片段 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的克隆连接 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物双酶切 | 第26页 |
| ·pET-44 载体双酶切 | 第26-27页 |
| ·目的基因与载体片段连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第28页 |
| ·转化子菌落 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的提取 | 第29页 |
| ·重组质粒的酶切 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-34页 |
| ·IFN-λ3 基因的扩增 | 第30页 |
| ·表达质粒的构建 | 第30-32页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 第二部分 IFN-λ的原核表达及纯化 | 第34-46页 |
| 1 实验材料 | 第34-38页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·主要试剂配制 | 第35-37页 |
| ·仪器设备 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-41页 |
| ·工程菌的诱导表达 | 第38页 |
| ·重组 IFN-λ3 蛋白可溶性分析 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第39页 |
| ·蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第39-40页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-46页 |
| ·IFN-λ3 融合蛋白的诱导表达及鉴定 | 第41-42页 |
| ·IFN-λ3 融合蛋白表达产物的可溶性分析及鉴定 | 第42-44页 |
| ·IFN-λ3 融合蛋白的纯化及鉴定 | 第44-46页 |
| 第三部分 IFN-λ在Con A 诱导的小鼠急性肝损伤中的作用 | 第46-58页 |
| 1 实验材料 | 第47-49页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要试剂制备 | 第47-48页 |
| ·仪器设备 | 第48-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-55页 |
| ·无内毒素质粒的大量制备 | 第49-50页 |
| ·Con A 诱导小鼠急性肝损伤模型的建立 | 第50页 |
| ·组织标本的制备 | 第50页 |
| ·组织病理学分析 | 第50-52页 |
| ·组织的石蜡包埋及切片 | 第50-51页 |
| ·切片的 HE 染色 | 第51-52页 |
| ·Real-time PCR 检测相关细胞因子的表达 | 第52-55页 |
| ·肝脏组织总 RNA 提取 | 第52-53页 |
| ·RNA 逆转录合成 cDNA | 第53页 |
| ·Real-time PCR 检测相关细胞因子的表达 | 第53-55页 |
| 3 实验结果 | 第55-58页 |
| ·组织切片病理 HE 染色结果 | 第55-56页 |
| ·相关细胞因子的表达 | 第56-58页 |
| 第四部分 IFN-λ对肝癌细胞生长的影响 | 第58-68页 |
| 1 实验材料 | 第59-60页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·主要试剂配制 | 第59-60页 |
| ·仪器设备 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-64页 |
| ·肝癌细胞的常规培养、冻存及复苏 | 第60-62页 |
| ·肝癌细胞的常规培养 | 第60页 |
| ·肝癌细胞的传代培养 | 第60-61页 |
| ·细胞的冻存 | 第61页 |
| ·细胞的复苏 | 第61-62页 |
| ·肝癌细胞 IFN-λ受体的测定 | 第62-63页 |
| ·肝癌细胞 RNA 提取 | 第62页 |
| ·RNA 逆转录合成 cDNA | 第62页 |
| ·RT-PCR 检测 IFN-λ受体表达 | 第62-63页 |
| ·MTS 法测定细胞增殖程度 | 第63页 |
| ·流式细胞术 (FACS) 检测 IFN-λ对肝癌细胞周期的影响 | 第63-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-68页 |
| ·肝癌细胞的培养及 IFN-λ受体的表达 | 第64-65页 |
| ·IFN-λ对肝癌细胞增殖的影响 | 第65-66页 |
| ·IFN-λ对肝癌细胞周期的影响 | 第66-68页 |
| 全文讨论 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录A 符号说明 | 第75-77页 |
| 附录B 综述 | 第77-88页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 在学研究成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
