| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-25页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌 | 第10-12页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的碳源代谢 | 第10-11页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌转运系统蛋白的基因组学研究 | 第11-12页 |
| ·糖类转运系统 | 第12-14页 |
| ·主要易化子超家族 | 第12-13页 |
| ·ABC转运蛋白超家族 | 第13-14页 |
| ·PTS系统 | 第14-22页 |
| ·PTS系统的简介 | 第15页 |
| ·PTS系统的组成 | 第15-17页 |
| ·PTS系统的运作机制 | 第17-18页 |
| ·PTS系统的其它作用 | 第18-22页 |
| ·相关研究进展 | 第22-23页 |
| ·本课题的研究意义及内容 | 第23-25页 |
| 第2章 实验材料 | 第25-30页 |
| ·菌株及质粒 | 第25页 |
| ·主要酶与试剂盒 | 第25-26页 |
| ·常用试剂配方以及主要用途 | 第26-27页 |
| ·培养基配方以及抗生素/诱导剂浓度 | 第27-28页 |
| ·主要仪器与设备 | 第28页 |
| ·应用软件与程序 | 第28-30页 |
| 第3章 实验方法 | 第30-47页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌621H菌株的PTS系统分析 | 第30-33页 |
| ·在唯一碳源条件下(葡萄糖/果糖)的生长曲线 | 第30页 |
| ·基因组提取 | 第30-31页 |
| ·抽提总RNA | 第31-32页 |
| ·PTS转运系统相关基因转录的RT-PCR检测 | 第32-33页 |
| ·与乳酸脱氢酶偶联的分光光度检测法 | 第33页 |
| ·体外磷酸化过程鉴定 | 第33-42页 |
| ·重组载体构建 | 第33-37页 |
| ·热击转化 | 第37页 |
| ·筛选鉴定重组子 | 第37页 |
| ·重组基因的诱导表达 | 第37页 |
| ·蛋白纯化 | 第37-38页 |
| ·包涵体处理 | 第38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第38-39页 |
| ·Bradford测蛋白浓度 | 第39页 |
| ·Western Blot | 第39-40页 |
| ·磷酸化检测 | 第40页 |
| ·Phos-tag Western Blot | 第40页 |
| ·Phos-tag Dot Blot | 第40-41页 |
| ·Phos-tag SDS-PAGE | 第41页 |
| ·等电聚焦电泳 | 第41页 |
| ·非变性凝胶电泳 | 第41-42页 |
| ·缺失突变菌的构建 | 第42-47页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·重叠PCR以及抗Kan片段PCR | 第42-43页 |
| ·质粒抽提 | 第43页 |
| ·pSUP202-GOX0812～814重组体的构建 | 第43-44页 |
| ·pSUP202-812～814-Kan的构建 | 第44-45页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌的感受态 | 第45页 |
| ·三亲本接合敲除 | 第45页 |
| ·Red重组 | 第45-47页 |
| 第4章 实验结果与讨论 | 第47-61页 |
| ·PTS系统分析 | 第47-51页 |
| ·在唯一碳源条件下(葡萄糖/果糖)的生长曲线 | 第47页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌621H基因序列分析 | 第47-50页 |
| ·PTS转运系统相关基因转录分析 | 第50页 |
| ·与乳酸脱氢酶偶联的分光光度检测法 | 第50-51页 |
| ·体外磷酸化过程鉴定 | 第51-58页 |
| ·目标蛋白诱导表达与纯化 | 第51-55页 |
| ·PTS组成蛋白的表达与纯化 | 第52-54页 |
| ·EIIA替代蛋白的表达与纯化 | 第54页 |
| ·HPr突变体蛋白以及HPr激酶的表达与纯化 | 第54-55页 |
| ·体外磷酸基团转移鉴定 | 第55-58页 |
| ·PTS磷酸化鉴定 | 第55-57页 |
| ·HPrK对HPr磷酸化作用机理 | 第57-58页 |
| ·缺失突变菌的构建 | 第58-61页 |
| ·重叠PCR以及抗Kan片段PCR | 第58-59页 |
| ·pSUP202-GOX0812～814-Kan重组质粒的构建 | 第59-60页 |
| ·三亲本接合敲除 | 第60页 |
| ·Red重组 | 第60-61页 |
| 第5章 总结与展望 | 第61-63页 |
| ·总结 | 第61-62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |