| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-29页 |
| ·结构生物学简介 | 第10-15页 |
| ·X-ray蛋白晶体衍射技术概论 | 第10-12页 |
| ·蛋白质结晶 | 第12-14页 |
| ·相角问题 | 第14-15页 |
| ·蛋白质结构的研究意义 | 第15-16页 |
| ·羧酸酯酶 | 第16-20页 |
| ·羧酸酯酶及其分类 | 第16-17页 |
| ·羧酸酯酶催化机理 | 第17-18页 |
| ·羧酸酯酶的结构 | 第18-20页 |
| ·羧酸酯酶的应用价值 | 第20页 |
| ·卤过氧化物酶 | 第20-27页 |
| ·卤过氧化物酶分类 | 第20-23页 |
| ·亚铁血红素卤过氧化物酶 | 第20-21页 |
| ·钒依赖的卤代过氧化物酶 | 第21-22页 |
| ·非金属依赖的卤过氧化物酶 | 第22-23页 |
| ·卤过氧化物酶介导的反应类型 | 第23-25页 |
| ·卤化反应 | 第23页 |
| ·氧化反应 | 第23-24页 |
| ·环氧化作用 | 第24页 |
| ·磺化氧化作用 | 第24页 |
| ·酯水解反应 | 第24-25页 |
| ·其他反应 | 第25页 |
| ·卤过氧化物酶的结构 | 第25-27页 |
| ·基于结构的蛋白质工程 | 第27-28页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第28页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第28-29页 |
| 第二章 一种新型耐热羧酸酯酶rPPE的结构功能研究 | 第29-53页 |
| ·前言 | 第29-30页 |
| ·实验材料与方法 | 第30-38页 |
| ·常用试剂 | 第30页 |
| ·常用溶液的配制 | 第30-32页 |
| ·常用设备 | 第32-33页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·rPE突变体的构建 | 第33-35页 |
| ·羧酸酯酶rPPE_(WT)及其突变体的蛋白表达 | 第35页 |
| ·羧酸酯酶rPPE_(WT)及其突变体的蛋白纯化 | 第35-36页 |
| ·蛋白浓度确定 | 第36页 |
| ·蛋白结晶 | 第36-37页 |
| ·结晶条件初筛及优化 | 第36页 |
| ·复合物晶体制备 | 第36-37页 |
| ·X-ray晶体衍射及数据收集 | 第37页 |
| ·衍射数据处理及结构解析 | 第37页 |
| ·对硝基苯酚酯水解活力的检测方法 | 第37-38页 |
| ·水解乙酰邻氯扁桃酸的活性与对映选择性测定方法 | 第38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-52页 |
| ·rPPE_(WT)晶体结构测定 | 第38-46页 |
| ·rPPE_(WT)及其突变体的蛋白纯化 | 第38-39页 |
| ·rPPE_(WT)结晶及衍射数据的收集与处理 | 第39-41页 |
| ·rPPE的整体结构及催化三联体 | 第41-43页 |
| ·rPPE的底物结合口袋 | 第43-44页 |
| ·rPPE的二聚体结构 | 第44-46页 |
| ·突变体rPPE_(W187H)的晶体结构 | 第46页 |
| ·rPPE_(W187H/S159A)与底物分子的复合物结构 | 第46-48页 |
| ·单点突变体rPPE_(W187H)及rPPE_(D287A)催化效率提高的分子机制 | 第48-49页 |
| ·rPPE手性识别机制 | 第49-51页 |
| ·rPE催化机理验证 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 卤过氧化物酶RhEst的晶体结构解析 | 第53-68页 |
| ·前言 | 第53-54页 |
| ·实验材料与方法 | 第54-56页 |
| ·常用试剂 | 第54页 |
| ·常用溶液的配制 | 第54页 |
| ·常用仪器 | 第54页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·RhEst母体蛋白的表达 | 第54-55页 |
| ·RhEst硒代蛋白表达 | 第55页 |
| ·蛋白纯化 | 第55页 |
| ·衍射数据处理及结构解析 | 第55页 |
| ·进化树的构建 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-67页 |
| ·卤过氧化物酶RhEst的晶体结构解析 | 第56-62页 |
| ·RhEst母体蛋白纯化 | 第56页 |
| ·RhEst母体蛋白结晶 | 第56-57页 |
| ·母体RhEst的衍射数据收集及结构解析 | 第57-58页 |
| ·RhEst硒代蛋白的表达纯化与结晶 | 第58-59页 |
| ·硒代RhEst的数据收集及结构解析 | 第59-60页 |
| ·RhEst分辨率1.95A晶体结构的解析 | 第60-62页 |
| ·RhEst的整体结构 | 第62-64页 |
| ·RhEst的两种不同构象 | 第64-65页 |
| ·RhEst进化途径分析 | 第65-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 结论与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 攻读硕士期间撰写的论文 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
