| 致谢 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 病原学 | 第11页 |
| 2 PRRSV 分子生物学 | 第11-14页 |
| ·PRRSV 基因组结构 | 第11-12页 |
| ·PRRSV 编码的非结构蛋白及其功能 | 第12-13页 |
| ·PRRSV 编码的结构蛋白及其功能 | 第13-14页 |
| 3 PRRSV 免疫学研究进展 | 第14-16页 |
| ·PRRSV 免疫调节和免疫逃逸 | 第14-15页 |
| ·PRRSV 抑制 I 型干扰素的产生 | 第14页 |
| ·PRRSV 诱导细胞因子 IL-10 | 第14页 |
| ·PRRSV 干扰正常的抗原呈递 | 第14-15页 |
| ·体液免疫 | 第15页 |
| ·PRRSV 免疫抑制 | 第15-16页 |
| ·PRRSV 疫苗 | 第16页 |
| 4 RNAi 研究进展 | 第16-20页 |
| ·RNAi 机制 | 第16-18页 |
| ·RNAi 是一种抗病毒免疫反应 | 第18-19页 |
| ·RNAi 一基因调控的工具 | 第19-20页 |
| 5 RNA 沉默抑制子（RNA silencing suppressor RSS）的研究进展 | 第20-23页 |
| ·HIV 的 Tat 蛋白介导 RNA 沉默抑制 | 第21页 |
| ·人类 A 型流感病毒的 NS1 蛋白作为 RSS | 第21页 |
| ·丙型肝炎病毒的核蛋白和外膜蛋白（E2）作为 RSS | 第21-22页 |
| ·埃博拉病毒的 VP35 作为 RSS | 第22页 |
| ·痘病毒的 EL3 蛋白作为 RSS | 第22页 |
| ·腺病毒非编码 RNA 作为 RSS | 第22-23页 |
| 6 本研究的意义 | 第23-25页 |
| 引言 | 第25-27页 |
| 第二部分 在 MARC-145 上构建 RNA 干扰的模型及其干扰效果鉴定 | 第27-37页 |
| 1 材料和方法 | 第27-33页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·细胞、质粒及载体 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·核苷酸序列 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-33页 |
| ·shRNA 干扰表达载体的干扰效果鉴定 | 第28-31页 |
| ·利用 PSGH1 载体转录 shRNA 对 EGFP 基因进行干扰 | 第28-30页 |
| ·293T 细胞的复苏及培养 | 第28-29页 |
| ·倒置荧光显微镜检测转染后 293T 细胞的荧光量 | 第29-30页 |
| ·倒置荧光显微镜检测转染后 293T 细胞的荧光量 | 第30页 |
| ·利用 PSGH1 载体转录 shRNA 对 Luc 进行干扰 | 第30-31页 |
| ·MARC-145 细胞复苏及培养 | 第30页 |
| ·PGL-4.17、PhRL-TK、PSGH1、PSGH1-shLuc 转染 MARC-145 细胞 | 第30-31页 |
| ·mi-RNA 干扰表达载体的干扰效果鉴定 | 第31-32页 |
| ·pcDNA6.2、pcDNA6.2-MDV-miR4、psiCHECK-MDV-UL28UTR 瞬时转染MARC-145 细胞 | 第31-32页 |
| ·人工合成的 dsRNA 干扰效果的鉴定 | 第32页 |
| ·人工合成的 dsRNA 转染 MARC-145 细胞 | 第32页 |
| ·双荧光报告基因系统检测萤火虫荧光素酶基因的表达量 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-35页 |
| ·检测 shRNA 干扰表达载体的有效性 | 第33-34页 |
| ·检测 mi-RNA 干扰表达载体的有效性 | 第34-35页 |
| ·检测人工合成的双链 dsRNA 的干扰效果 | 第35页 |
| 3 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 PRRSV 及其 Nsp1、Nsp11 对 RNAi 诱导的基因沉默的影响 | 第37-45页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·病毒、质粒 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·PRRSV 对由 shRNA、dsRNA、mi-RNA 诱导的基因沉默的影响 | 第37-38页 |
| ·shRNA、dsRNA、mi-RNA 分别瞬时转染 MARC-145 细胞 | 第37-38页 |
| ·PRRSV 作用于转染了 shRNA、dsRNA、mi-RNA 的 MARC-145 细胞 | 第38页 |
| ·nsp1、nsp11、nsp1α、nsp1β对 RNAi 诱导基因沉默的影响 | 第38-40页 |
| ·nsp1、nsp11、nsp1α、nsp1β表达质粒分别与 shRNA 共转染 MARC-145细胞 | 第38-39页 |
| ·nsp1、nsp11、nsp1α、nsp1β表达质粒分别与 dsRNA 共转染 MARC-145细胞 | 第39页 |
| ·nsp1、nsp11、nsp1α、nsp1β表达质粒分别与 mi-RNA 共转染 MARC-145细胞 | 第39-40页 |
| ·双荧光报告基因系统检测萤火虫荧光素酶基因的表达量 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-43页 |
| ·PRRSV 抑制 shRNA、dsRNA、mi-RNA 诱导的 RNA 沉默 | 第40-41页 |
| ·PRRSV 的 nsp1α和 nsp11 是 RNA 沉默的抑制子 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 nsp1α木瓜蛋白酶和 nsp11 核酸内切酶失活后对 RNAi 诱导的基因沉默的影响 | 第45-49页 |
| 1 材料与方法 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·细胞、质粒 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·nsp1α及其突变体质粒对 RNAi 诱导基因沉默的影响 | 第45页 |
| ·nsp1α及其突变体质粒分别与 shRNA 共转染 MARC-145 细胞 | 第45页 |
| ·nsp1α及其突变体质粒分别与 dsRNA 共转染 MARC-145 细胞 | 第45页 |
| ·nsp1α及其突变体质粒分别与 miRNA 共转染 MARC-145 细胞 | 第45页 |
| ·nsp11 及其突变体质粒对 RNAi 诱导基因沉默的影响 | 第45页 |
| ·nsp11 及其突变体质粒分别与 shRNA 共转染 MARC-145 细胞 | 第45页 |
| ·nsp11 及其突变体质粒分别与 dsRNA 共转染 MARC-145 细胞 | 第45页 |
| ·nsp11 及其突变体质粒分别与 miRNA 共转染 MARC-145 细胞 | 第45页 |
| ·双荧光报告基因系统检测萤火虫荧光素酶基因的表达量 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-47页 |
| ·nsp1α的木瓜蛋白酶的活性是它作为 RNA 沉默抑制子所必需的 | 第46页 |
| ·nsp11 的核酸内切酶的活性是它作为 RNA 沉默抑制子所必需的 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第五部分 全文总结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| Abstract | 第57-58页 |
