| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-20页 |
| 1 禽流感概述 | 第13页 |
| 2 H9N2 亚型禽流感的流行情况 | 第13-14页 |
| 3 禽流感病原学研究进展 | 第14-15页 |
| ·禽流感的分类及亚型 | 第14页 |
| ·禽流感的形态特征及理化特性 | 第14页 |
| ·禽流感的培养特性 | 第14-15页 |
| ·禽流感病毒的传播 | 第15页 |
| 4 禽流感病毒的分子生物学研究进展 | 第15-19页 |
| ·禽流感病毒的基因组结构特征 | 第15页 |
| ·禽流感病毒 HA、NA 基因及其编码蛋白的结构和功能 | 第15-17页 |
| ·HA 基因及其编码的蛋白的结构和功能 | 第15-17页 |
| ·NA 基因及其编码的蛋白的结构和功能 | 第17页 |
| ·禽流感病毒的遗传变异 | 第17-19页 |
| ·禽流感病毒的抗原性变异 | 第17-18页 |
| ·抗原漂移 | 第18页 |
| ·抗原转变 | 第18页 |
| ·禽流感病毒的致病性变异 | 第18-19页 |
| 5 细胞培养禽流感病毒研究进展 | 第19-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 试验一 河南部分地区 H9 亚型禽流感病毒的分离鉴定及交叉免疫攻毒保护试验 | 第21-28页 |
| 1 材料与方法 | 第21-24页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·SPF 种蛋、SPF 鸡 | 第21页 |
| ·病料来源与背景 | 第21页 |
| ·分离病毒株 | 第21页 |
| ·交叉免疫保护试验 HI 试验抗原 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-24页 |
| ·病毒的分离与鉴定 | 第21-23页 |
| ·病料采集及处理 | 第22页 |
| ·病毒的分离培养及纯化 | 第22页 |
| ·HA 试验及 HI 试验 | 第22页 |
| ·中和试验 | 第22页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第22页 |
| ·cDNA 第一连的合成 | 第22页 |
| ·PCR 扩增 HA 基因进行检测 | 第22-23页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·4株病毒的毒力(EID50)测定 | 第23页 |
| ·交叉免疫保护试验 | 第23-24页 |
| ·免疫用疫苗的制备 | 第23页 |
| ·免疫试验设计 | 第23页 |
| ·HI 效价的测定 | 第23-24页 |
| ·交叉攻毒保护试验 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-26页 |
| ·病毒分离结果 | 第24页 |
| ·LH11,ZZ11 两个分离株的 RT-PCR 结果 | 第24-25页 |
| ·病毒 HA 效价及 EID50 测定结果 | 第25页 |
| ·HI 抗体测定结果 | 第25-26页 |
| ·流行毒株间的交叉攻毒保护试验结果 | 第26页 |
| 3 结论与讨论 | 第26-28页 |
| 试验二 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 细胞上的培养特性研究 | 第28-38页 |
| 1 材料与方法 | 第28-30页 |
| ·试验材料 | 第28-29页 |
| ·MDCK 细胞 | 第28页 |
| ·H9 亚型禽流感病毒 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·细胞培养相关试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·HA 试验相关试剂的配制 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-30页 |
| ·MDCK 细胞的复苏及培养 | 第29页 |
| ·病毒维持液中 TPCK-胰酶含量对 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 上增殖的影响 | 第29页 |
| ·病毒维持液中血清含量对 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 上增殖的影响 | 第29-30页 |
| ·H9 亚型禽流感病毒的接种量对其在细胞上增殖的影响 | 第30页 |
| ·吸附时间对 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 上增殖的影响 | 第30页 |
| ·4 株 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 细胞上的连续传代 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-35页 |
| ·病毒维持液中 TPCK-胰酶含量对 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 上增殖的影响 | 第30-33页 |
| ·病毒维持液中血清含量对 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 上增殖的影响 | 第33-34页 |
| ·接种含量对 H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 上增殖的影响 | 第34页 |
| ·病毒在细胞中吸附的时间对 H9 亚型禽流感病毒 HA 滴度的影响 | 第34-35页 |
| ·H9 亚型禽流感病毒在 MDCK 细胞上连续传代的 HA 滴度 | 第35页 |
| 3 结论与讨论 | 第35-38页 |
| 试验三 H9 亚型禽流感病毒胚毒和细胞毒 HA 基因和 NA 基因的克隆与序列分析 | 第38-54页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| ·试验材料 | 第38-39页 |
| ·毒株 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第38页 |
| ·质粒与菌种 | 第38页 |
| ·试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·琼脂糖电泳试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌转化用溶液 | 第39页 |
| ·试验方法 | 第39-43页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第39页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第39页 |
| ·HA、NA 基因的 PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·1%琼脂糖凝胶电泳 | 第40页 |
| ·4 株河南分离株及 ZZ11 株毒不同代次细胞毒的 HA、NA 基因的克隆及鉴定 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR 产物的胶回收纯化 | 第40页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第40-41页 |
| ·连接产物的转化 | 第41页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第41页 |
| ·重组质粒的提取 | 第41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·4 株分离毒株及 ZZ11 毒株的 4 代细胞培养毒的 HA、NA 基因核苷酸序列测定及序列分析 | 第41-42页 |
| ·4 株 H9 亚型禽流感病毒 HA、NA 基因系统进化树分析 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-52页 |
| ·4 株分离毒株及 ZZ11 毒株的 4 代细胞毒 HA、NA 基因片段 RT-PCR 扩增结果 | 第43页 |
| ·4 株分离毒株及 ZZ11 毒株的 4 代细胞毒 HA、NA 基因片段 RT-PCR 产物胶回收纯化结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及测序鉴定 | 第44-45页 |
| ·HA、NA 基因序列测定及序列分析 | 第45-51页 |
| ·4 株毒 HA 基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第45-47页 |
| ·4 株毒 NA 基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第47-50页 |
| ·ZZ11 株胚毒与其细胞毒 HA、NA 基因核苷酸和氨基酸序列分析 | 第50-51页 |
| ·系统进化树分析 | 第51-52页 |
| 3 结论与讨论 | 第52-54页 |
| 全文总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| Abstract | 第64-67页 |
| 附录 | 第67-70页 |
