| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 1 前言 | 第14-38页 |
| ·细菌质粒的基本特征 | 第14-21页 |
| ·质粒的复制方式 | 第14-17页 |
| ·质粒的θ复制 | 第15-16页 |
| ·质粒的滚环复制 | 第16-17页 |
| ·质粒的D-环复制 | 第17页 |
| ·质粒的拷贝数和质粒的不相容性 | 第17-18页 |
| ·质粒的拷贝数 | 第17页 |
| ·质粒的不相容性 | 第17-18页 |
| ·质粒分离的稳定性 | 第18-19页 |
| ·位点特异性重组系统 | 第18-19页 |
| ·主动分配系统 | 第19页 |
| ·质粒沉溺系统 | 第19页 |
| ·质粒的可移动性 | 第19-21页 |
| ·接合转移松弛酶 | 第21-32页 |
| ·松弛酶的接合转移功能及分类 | 第22-31页 |
| ·MOB_F家族 | 第23-24页 |
| ·MOB_H家族 | 第24-26页 |
| ·MOB_C家族 | 第26页 |
| ·MOB_Q家族 | 第26-27页 |
| ·MOB_P家族 | 第27-28页 |
| ·MOB_V家族 | 第28-31页 |
| ·松弛酶的oriT位点特异性重组功能 | 第31-32页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的研究概况 | 第32-36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌基因组的研究概况 | 第33-34页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的功能研究 | 第34-36页 |
| ·携带杀虫晶体蛋白基因及其辅助蛋白基因 | 第34-35页 |
| ·携带转座因子 | 第35页 |
| ·编码与接合转移相关的基因 | 第35-36页 |
| ·质粒分离融合机制的研究目的和意义 | 第36-38页 |
| 2 材料和方法 | 第38-53页 |
| ·实验材料 | 第38-46页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第38-43页 |
| ·使用抗生素 | 第43-44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·试剂和仪器 | 第44-46页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·缓冲液及配方 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-53页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第46-49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的制备 | 第46页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA的制备 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第47页 |
| ·苏云金芽胞杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及CaCl_2转化 | 第48页 |
| ·mob02281基因的点突变 | 第48-49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒稳定性检测 | 第49页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第49-50页 |
| ·配制SDS-PAGE凝胶 | 第49页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第49-50页 |
| ·SDS-PAGE电泳的蛋白样品制备 | 第50页 |
| ·质粒的接合转移 | 第50页 |
| ·同源重组 | 第50-51页 |
| ·位点特异性重组实验 | 第51页 |
| ·Mob蛋白的表达纯化和切割活性检测 | 第51-52页 |
| ·α淀粉酶活性检测 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-100页 |
| ·质粒pBMB0228的序列分析及相关基因功能验证 | 第53-57页 |
| ·质粒pBMB0228的复制元件功能验证 | 第54-55页 |
| ·质粒pBMB0228的接合转移元件功能验证 | 第55-57页 |
| ·质粒pBMB0228的分离融合机制研究 | 第57-80页 |
| ·质粒pBMB0228分离现象的发现 | 第57-60页 |
| ·质粒pBMB0228：：Erm的分离位点的确定 | 第60-61页 |
| ·质粒pBMB0228的分离机制的解析 | 第61-74页 |
| ·Mob02281和Mob02282参与了质粒pBMB0228的分离 | 第62-68页 |
| ·Mob02281和Mob02282对oriT1和oriT2的切割活性检测 | 第68-69页 |
| ·质粒pBMB0228分离机制是Mob蛋白介导的oriT位点特异性重组 | 第69-74页 |
| ·质粒pBMB0228的融合机制的确定 | 第74-80页 |
| ·质粒pBMB02281：：Erm和pBMB02282：：Spc的融合 | 第74-77页 |
| ·融合质粒的形成机制是Mob蛋白介导的oriT位点特异性整合 | 第77-80页 |
| ·重组所需的mini-oriT区及Mob02281活性Aa的确定 | 第80-83页 |
| ·oriT位点特异性重组所需的mini-oriT的确定 | 第80-81页 |
| ·介导oriT位点特异性重组的Mob02281活性结构域及关键氨基酸位点的确定 | 第81-83页 |
| ·接合转移重组载体的构建及效果检测 | 第83-94页 |
| ·Mob02281模块在芽胞杆菌群不同菌株中的接合转移能力检测 | 第83-85页 |
| ·Mob02281介导的oriT的24bp核心序列的重组效率检测 | 第85-87页 |
| ·温敏型接合转移重组载体的构建 | 第87-88页 |
| ·载体pRec-mob1-Ts用于BMB171染色体amyE基因的同框缺失 | 第88-91页 |
| ·BMB171的amyE基因同框缺失突变体BMB0260的获得 | 第88-89页 |
| ·BMB171的amyE基因同框缺失突变体BMB0260的表型检测和结果分析 | 第89-91页 |
| ·载体pRec-mobl-Ts用于BMB171染色体上cry5Ba2和cry2Aa9的基因插入 | 第91-94页 |
| ·cry基因插入突变体BMB0261和BMB0262的获得 | 第91-92页 |
| ·cry基因插入突变体BMB0261和BMB0262表型检测 | 第92-94页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-1518基因组测序及序列初步分析 | 第94-100页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-1518基因组的基本特征 | 第95-98页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-1518在蜡状芽胞杆菌群的分类地位 | 第98-100页 |
| 4 讨论 | 第100-107页 |
| ·质粒pBMB0228是一个有价值的用于质粒进化研究的材料 | 第101页 |
| ·质粒pBMB0228的分离和融合揭示了一种质粒通过接合转移和oriT位点特异性重组进化的模型 | 第101-103页 |
| ·整合质粒pBMB0228可能以一种新的机制进行复制 | 第103-104页 |
| ·YBT-1518中含有抑制pBMB0228分离的稳定因子 | 第104页 |
| ·单链DNA(ssDNA)的暴露会增加oriT位点重组的效率 | 第104-105页 |
| ·Mob02281和Mob02282介导的oriT位点重组不需要质粒编码的辅助蛋白的参与 | 第105页 |
| ·Mob蛋白介导的oriT位点特异性重组可用于基因插入和基因敲除中引入的抗性基因的删除 | 第105-106页 |
| ·YBT-1518的杀线虫活性是多种毒力因子综合作用的结果,体现了细菌中一些基因与特定表型之间的共进化 | 第106-107页 |
| 5 总结与创新点 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 已发表和待发表文献及申请专利 | 第119页 |
