| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 小麦赤霉病的研究进展 | 第11-14页 |
| ·小麦赤霉病的分布和危害 | 第11-12页 |
| ·禾谷镰刀菌的生物学特征 | 第12-13页 |
| ·禾谷镰刀菌的研究进展 | 第13-14页 |
| 2 微小RNA的研究进展 | 第14-15页 |
| 3 小RNA通路相关基因的研究介绍 | 第15-19页 |
| ·Dicer蛋白的研究进展 | 第15-17页 |
| ·Argonaute蛋白的研究进展 | 第17-19页 |
| 4 本实验的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 禾谷镰刀菌FGDCL2和FGAGL2的敲除和互补载体的构建及转化 | 第20-46页 |
| 1 实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·载体 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·抗生素 | 第22页 |
| ·常用试剂及溶液 | 第22-23页 |
| ·设备仪器 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-35页 |
| ·基因序列分析 | 第23-24页 |
| ·基因表达量分析 | 第24-26页 |
| ·基因组RNA提取 | 第24页 |
| ·cDNA的制备 | 第24-25页 |
| ·基因表达量检测 | 第25-26页 |
| ·基因组DNA提取——CTAB法 | 第26-27页 |
| ·敲除载体的构建 | 第27-31页 |
| ·Split PCR方法构建基因敲除载体 | 第27页 |
| ·基因侧翼同源片段的获得 | 第27-28页 |
| ·基因侧翼同源片段的纯化 | 第28页 |
| ·侧翼片段与具有HPH抗性载体的连接 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的热击转化 | 第29页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·PCR获得具有HPH的侧翼片段 | 第30-31页 |
| ·基因互补 | 第31-32页 |
| ·基因互补载体构建 | 第31页 |
| ·基因互补载体验证 | 第31-32页 |
| ·敲除转化子的鉴定 | 第32-34页 |
| ·禾谷镰刀菌PH-1原生质体的制备 | 第32页 |
| ·禾谷镰刀菌原生质体介导的PEG转化 | 第32-33页 |
| ·敲除转化子的PCR验证 | 第33-34页 |
| ·NEO筛选标记的敲除载体的构建 | 第34-35页 |
| ·基因侧翼同源片段的获得 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的获得 | 第35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-45页 |
| ·FGDCL2和FGAGL2基因的蛋白结构分析 | 第35-36页 |
| ·FGDCL2和FGAGL2的表达量分析 | 第36页 |
| ·FGDCL2和FGAGL2敲除载体的构建 | 第36-38页 |
| ·PCR获得具有HPH的侧翼片段 | 第38-39页 |
| ·FGDCL2基因的互补片段 | 第39-40页 |
| ·FGDCL2基因互补载体的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·FGDCL2基因互补载体的测序结果 | 第41页 |
| ·FGDCL2和FGAGL2敲除转化子的PCR验证 | 第41-42页 |
| ·NEO筛选标记的敲除载体的鉴定 | 第42-45页 |
| 4 小结与讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 禾谷镰刀菌FGDCL2和FGAGL2基因功能的初步研究 | 第46-62页 |
| 1 材料与方法 | 第46页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·设备仪器 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-50页 |
| ·菌落形态和菌丝尖端的观察 | 第46-47页 |
| ·分生孢子的形态观察 | 第47页 |
| ·生长速度的测定 | 第47页 |
| ·生物产量的测定 | 第47-48页 |
| ·产孢量测定 | 第48页 |
| ·分生孢子的萌发 | 第48页 |
| ·子囊壳堆的观察和有性孢子的观察 | 第48页 |
| ·致病力测定 | 第48-49页 |
| ·毒素相关基因的表达检测 | 第49页 |
| ·不同温度的敏感性测定 | 第49-50页 |
| ·不同盐离子浓度的敏感性 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-61页 |
| ·菌落形态和菌丝尖端的观察 | 第50-51页 |
| ·分生孢子形态观察 | 第51页 |
| ·生长速度测定 | 第51-52页 |
| ·生物产量的测定 | 第52-53页 |
| ·产孢量测定 | 第53页 |
| ·分生孢子的萌发 | 第53-54页 |
| ·子囊壳堆的观察和有性孢子的观察 | 第54-56页 |
| ·致病力测定 | 第56-57页 |
| ·产毒素相关基因表达检测 | 第57-58页 |
| ·不同温度的敏感性测定 | 第58-59页 |
| ·不同盐离子浓度的敏感性测定 | 第59-61页 |
| 4 小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第四章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
