| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述蛋白质类泛素化修饰的研究进展 | 第14-23页 |
| 1 类泛素家族介绍 | 第14-15页 |
| 2 类泛素化修饰反应途径 | 第15-16页 |
| 3 类泛素的生物学功能 | 第16-22页 |
| ·类泛素化修饰效果 | 第16-17页 |
| ·类泛素对细胞功能的调控 | 第17-20页 |
| ·类泛素修饰与细菌 | 第20-22页 |
| 4 总结 | 第22-23页 |
| 第二章 试验研究 | 第23-58页 |
| 试验一 鼠源类泛素蛋白原核表达、纯化及抗体的制备 | 第23-38页 |
| 摘要 | 第23页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·细胞、载体与实验动物 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-29页 |
| ·鼠源类泛素 SUMO1/2/2 基因的克隆和克隆载体的构建及鉴定 | 第24-27页 |
| ·pET-32a(+) - SUMO1/2/3 原核表达载体的构建及鉴定 | 第27页 |
| ·pET-32a-SUMO1/2/3 蛋白的表达及鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第28-29页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-36页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第29-31页 |
| ·克隆载体的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组表达质粒 pET-32a(+)-SUMO1/2/3 构建与鉴定 | 第32-33页 |
| ·组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白的纯化与鉴定 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| ·关于类泛素与其底物 | 第36-37页 |
| ·鼠源类泛素蛋白表达与纯化 | 第37页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 试验二 布鲁氏菌介导对细胞类泛素表达影响的研究 | 第38-45页 |
| 摘要 | 第38页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| ·菌株和细胞 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-40页 |
| ·小鼠巨噬细胞的培养 | 第39页 |
| ·western bolt 检测细胞中 SUMO1 蛋白的表达 | 第39页 |
| ·Real-time PCR 相对定量分析 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| ·western bolt 检测细胞中SUMO1 蛋白结果 | 第40-41页 |
| ·Real-time PCR 相对定量结果 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| ·western bolt 检测细胞中SUMO1 蛋白表达 | 第43页 |
| ·qRT-PCR 检测细胞中类泛素 mRNA 表达水平 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 试验三 类泛素 SUMO1 对布鲁氏菌胞内生存与细胞凋亡的影响 | 第45-58页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·pcDNA - SUMO1 真核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·pcDNA - SUMO1 质粒在巨噬细胞中的表达 | 第47页 |
| ·SUMO1 对布鲁氏菌胞内存活的影响 | 第47页 |
| ·SUMO1 对布鲁氏菌介导细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-56页 |
| ·SUMO1 基因的 P CR 扩增 | 第48页 |
| ·pMD- SUMO1 克隆载体的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| ·pcDNA - SUMO1 真核表达载体的构建及鉴定 | 第49页 |
| ·pcDNA - SUMO1 质粒在巨噬细胞中的表达 | 第49-50页 |
| ·SUMO1 对布鲁氏菌胞内存活的影响 | 第50-52页 |
| ·流式细胞术检测 SUMO1 对布鲁氏菌介导细胞凋亡 | 第52-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| ·类泛素与病原菌的关系 | 第56页 |
| ·类泛素与凋亡的关系 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 第三章 论文结论与创新点 | 第58-59页 |
| 论文结论 | 第58页 |
| 创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68-69页 |
| 附件 | 第69页 |
