| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 英文缩写词表 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 综述一 结核病流行现状及结核杆菌分泌蛋白ESAT6、CFP10的研究 | 第15-24页 |
| 1 结核病流行现状 | 第16-17页 |
| ·世界范围内结核病的流行现状 | 第16页 |
| ·中国结核病的流行现状 | 第16页 |
| ·牛结核病的流行现状 | 第16-17页 |
| ·结核病与艾滋病 | 第17页 |
| 2 结核分枝杆菌及其致病物 | 第17-18页 |
| ·结核分枝杆菌 | 第17-18页 |
| ·结核杆菌致病物 | 第18页 |
| 3 结核免疫学研究 | 第18-21页 |
| ·对抗结核病的天然免疫 | 第18-19页 |
| ·特异性免疫 | 第19-20页 |
| ·结核免疫中重要的细胞因子 | 第20-21页 |
| 4 结核杆菌分泌性蛋白ESAT6和CFP10的研究进展 | 第21-24页 |
| ·分泌性蛋白ESAT6和CFP10的发现 | 第21-22页 |
| ·ESAT6 禾口 CFP10 介绍 | 第22-23页 |
| ·CFP10和ESAT6蛋白的特点 | 第23页 |
| ·分泌性蛋白ESAT6与CFP10的应用研究 | 第23-24页 |
| 综述二 细胞凋亡的相关研究 | 第24-29页 |
| 1 半胱氨酸蛋白酶（Caspase) | 第24-25页 |
| ·Caspase 介绍 | 第24-25页 |
| ·Caspase 结构特点 | 第25页 |
| 2 凋亡信号转导触发途径 | 第25-26页 |
| ·外源死亡受体介导的凋亡 | 第25页 |
| ·线粒体介导的内源性凋亡 | 第25-26页 |
| ·内质网介导的凋亡 | 第26页 |
| 3 凋亡相关基因的检测 | 第26-29页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第26-27页 |
| ·实时荧光定量PCR技术分类 | 第27-29页 |
| 第二章 实验研究 | 第29-63页 |
| 试验一 结核杆菌毒力因子ESAT6、CFP10真核表达载体构建及表达 | 第29-39页 |
| 摘要 | 第29-30页 |
| 1 材料和方法 | 第30-35页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·菌株、质粒与细胞 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·模板制备 | 第31页 |
| ·目的片段PCR扩増 | 第31页 |
| ·PCR产物纯化 | 第31-32页 |
| ·感受态的制备 | 第32页 |
| ·pGM18-T-ESAT6> pGM18-T-CFH0 重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·pGM18-T-ESAT6> pGM18-T-CFP10重组质粒的PCR及双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·pEGFP-Nl-ESAT6> pEGFP-Nl-CFP10 重组真核表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·pEGFP-Nl-ESAT6> pEGFP-Nl-CFP10 重组质料的 PCR 及双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·大提质粒 | 第34页 |
| ·转染 293T 细胞 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| ·ESAT6、CFP10 基因的扩增 | 第35页 |
| ·pGM18-T-ESAT6、pGM18-T-CFP10重组质粒PCR及双酶切鉴定 | 第35页 |
| ·PCR及双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·大提质粒浓度的测定结果 | 第36-37页 |
| ·细胞转染结果 | 第37-38页 |
| 4 小结 | 第38-39页 |
| 试验二 细胞内融合蛋白ESAT6-EGFP、CFP10-EGFP的Western Blot分析和定位分析 | 第39-46页 |
| 摘要 | 第39页 |
| 1 材料和方法 | 第39-42页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·细胞 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-42页 |
| ·293T细胞的转染 | 第40页 |
| ·293T细胞转染后蛋白样品制备 | 第40页 |
| ·转染细胞蛋白的SDS-PAGE | 第40-41页 |
| ·融合蛋白 ESAT6-EGFP、CFP10-EGFP 的 Westenr Blot 分析 | 第41-42页 |
| ·激光共聚焦观察中细胞样品的制备 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-44页 |
| ·细胞克隆中ESAT6、CFP10融合蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·激光共聚焦结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 试验三 结核杆菌毒力因子ESAT6、CFP10对细胞凋亡影响的初步研究 | 第46-56页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·不同时间段的细胞凋亡率分析 | 第47-48页 |
| ·不同时间段细胞总RNA的提取 | 第48页 |
| ·凋亡相关基因的引物设计 | 第48-49页 |
| ·实时定量PCR对凋亡相关基因的分析 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-54页 |
| ·不同时间流式细胞仪分析结果 | 第49-51页 |
| ·RNA提取结果 | 第51页 |
| ·实时定量PCR结果 | 第51-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 试验四 结核杆菌ESAT6、CFP10基因DNA疫苗对小鼠免疫原性的初步研究 | 第56-63页 |
| 摘要 | 第56页 |
| 1 材料与方法 | 第56-57页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57页 |
| ·32a-CFP10、28a-GFP-ESAT6 原核蛋白的表达、纯化 | 第57页 |
| ·小鼠分组及免疫 | 第57页 |
| ·小鼠血清中抗体检测 | 第57页 |
| ·小鼠血清中IFN-y检测 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-61页 |
| ·ESAT6、CFP10原核蛋白的纯化及Western Blot验证结果 | 第57-58页 |
| ·小鼠血清中抗体检测结果 | 第58-60页 |
| ·IFN-γ检测结果 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| 4 小结 | 第62-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师评阅表 | 第73页 |
