| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-36页 |
| ·肝素 | 第13-17页 |
| ·肝素简介 | 第13-15页 |
| ·国内动物内脏提取肝素(钠)存在的问题 | 第15-17页 |
| ·低分子肝素 | 第17-21页 |
| ·低分子肝素简介 | 第17-19页 |
| ·低分子肝素钠的制备方法 | 第19-21页 |
| ·肝素酶 | 第21-26页 |
| ·肝素酶简介 | 第21-22页 |
| ·肝素酶生产菌 | 第22-23页 |
| ·微生物基因组中肝素酶同源基因 | 第23页 |
| ·肝素酶Ⅰ作用机理 | 第23-25页 |
| ·肝素酶Ⅱ作用机理 | 第25-26页 |
| ·肝素酶的重组表达研究 | 第26-28页 |
| ·肝素酶Ⅰ的重组表达研究 | 第26-27页 |
| ·其它肝素酶的重组表达 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌中蛋白可溶表达策略 | 第28-32页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白表达系统简介 | 第28-29页 |
| ·不同的宿主菌对蛋白可溶表达的影响 | 第29页 |
| ·与分子伴侣或折叠酶共表达 | 第29-30页 |
| ·融合表达 | 第30-31页 |
| ·分泌表达 | 第31页 |
| ·培养条件和诱导方法的选择 | 第31-32页 |
| ·分子伴侣简介 | 第32-35页 |
| ·分子伴侣的种类 | 第33页 |
| ·GroEL/ES结构 | 第33-34页 |
| ·GroEL/ES复性作用机理 | 第34-35页 |
| ·本课题拟研究内容 | 第35-36页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第36-41页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·质粒和基因 | 第36页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·实验及分析方法 | 第38-41页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第38-39页 |
| ·菌体浓度测定 | 第39页 |
| ·大肠杆菌细胞超声破碎及胞内蛋白提取 | 第39-40页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第40-41页 |
| 第三章 肝素裂解酶Ⅰ在重组大肠杆菌中的高效表达和分离纯化 | 第41-53页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·材料与方法 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·重组菌培养及蛋白表达 | 第42页 |
| ·5L发酵罐扩大培养 | 第42页 |
| ·酶活测定方法 | 第42-43页 |
| ·目标蛋白的纯化 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-52页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第43页 |
| ·不同培养基条件下宿主菌的生长情况 | 第43-44页 |
| ·诱导温度对重组蛋白表达的影响 | 第44-46页 |
| ·诱导剂浓度对重组蛋白表达的影响 | 第46页 |
| ·诱导时机对重组蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| ·诱导后培养时间对重组蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| ·5L发酵罐中补料培养情况 | 第48-50页 |
| ·镍柱亲和层析纯化目标蛋白 | 第50-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 肝素裂解酶Ⅱ在重组大肠杆菌中的高效表达和分离纯化 | 第53-61页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·不同培养基条件下宿主菌的生长情况 | 第54-55页 |
| ·不同诱导后培养温度对Hep Ⅱ表达的影响 | 第55-56页 |
| ·不同的诱导时间对Hep Ⅱ表达的影响 | 第56-57页 |
| ·不同IPTG浓度对Hep Ⅱ表达的影响 | 第57-58页 |
| ·不同诱导后培养时间对Hep Ⅱ表达的影响 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第五章 肝素裂解酶Ⅲ在重组大肠杆菌中的高效表达和分离纯化 | 第61-70页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-68页 |
| ·不同培养基条件下宿主菌的生长情况 | 第61-62页 |
| ·不同诱导后培养温度对Hep Ⅲ表达的影响 | 第62-64页 |
| ·不同的诱导时间对Hep Ⅲ表达的影响 | 第64-65页 |
| ·不同IPTG浓度对Hep Ⅲ表达的影响 | 第65-66页 |
| ·不同诱导后培养时间对Hep Ⅲ表达的影响 | 第66-67页 |
| ·重组Hep Ⅲ的分离纯化 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第六章 结论与展望 | 第70-72页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| ·课题展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
| 教育简历 | 第80页 |
| 攻读硕士学位论文期间主要科研成果 | 第80页 |
