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杀稻瘟菌素的异源表达及其基因簇内关键基因的体内功能研究

摘要第1-6页
Abstract第6-14页
符号说明第14-16页
第一章 文献综述第16-52页
   ·核苷类抗生素简介第16-43页
     ·核苷类抗生素的分类第16-22页
   (1) 基本同系物第16页
   (2) 腺苷类第16-17页
   (3) 鸟苷类第17页
   (4) 咪唑并嘧啶核苷类第17-18页
   (5) 四氢咪唑并二氮杂 类第18页
   (6) C-核苷类第18-19页
   (7) 氨磺酰核苷类第19页
   (8) 3’-氨乙酰基-3’-脱氧腺苷类第19页
   (9) 4’-氨乙酰基-4’-脱氧脱氧己糖胞嘧啶类第19-20页
   (10) 配糖基核苷类第20页
   (11) 肽核苷类第20-21页
   (12) 高碳糖核苷第21页
   (13) 脂肪酰基核苷类第21页
   (14) 核苷酸第21-22页
   (15) 其他第22页
     ·核苷类抗生素生物合成的研究进展第22-43页
   (1) 米多霉素生物合成基因簇第23-27页
   (2) 多氧霉素生物合成基因簇第27-31页
   (3) 嘌呤霉素生物合成基因簇第31-33页
   (4) 杀绿霉素生物合成基因簇第33-37页
   (5) 尼克霉素的生物合成基因簇第37-42页
   (6) 链丝菌素的生物合成基因簇第42-43页
   ·杀稻瘟菌素研究背景和简介第43-52页
     ·杀稻瘟菌素的化学结构第43页
     ·杀稻瘟菌素在农业方面的应用第43-45页
     ·杀稻瘟菌素在基因工程方面的应用第45-48页
     ·杀稻瘟菌素的生物合成途径的研究第48-52页
第二章 实验材料和方法第52-72页
   ·实验材料第52-58页
     ·菌株第52-53页
     ·质粒第53-55页
     ·培养基和化学试剂第55-57页
     ·本实验所用的 PCR 引物第57-58页
   ·实验方法第58-72页
     ·菌种培养及菌种保藏第58-59页
     ·质粒 DNA 的提取第59页
     ·链霉菌总 DNA 的少量快速提取第59-60页
     ·片段的回收第60页
     ·放射性同位素杂交第60-62页
     ·链霉菌原生质体的制备及 DNA 转化第62页
     ·两亲本杂交介导的质粒 DNA 的跨属转移第62-63页
     ·灰色产色链霉菌基因组文库的构建第63-65页
     ·基因组文库的筛选第65页
     ·生物信息学分析第65-66页
     ·杀稻瘟菌素生物合成基因簇嫁接到变铅青链霉菌中第66-67页
     ·双交换基因置换质粒的构建(以 pJTU412 为载体,目的基因被壮观霉素抗性基因替换)第67-68页
     ·双交换基因置换基因中断菌株的筛选(以 pJTU412 为载体,目的基因被壮观霉素抗性基因替换)第68页
     ·双交换基因置换突变菌株的筛选和确认第68-69页
     ·杀稻瘟菌素及其衍生物的发酵第69页
     ·杀稻瘟菌素的生物测定第69-70页
     ·杀稻瘟菌素及其衍生化合物的 HPLC-MS 测定第70页
     ·融合蛋白 SLBSD 的表达第70-71页
     ·融合蛋白 SLBSD 的体外分析第71-72页
第三章 杀稻瘟菌素生物合成基因簇在变铅青链霉菌中的异源表达及 SLBSD 基因的发现第72-91页
   ·杀稻瘟菌素生物合成基因簇下游基因的测序和生物信息学分析第72-73页
   ·杀稻瘟菌素生物合成基因簇在变铅青链霉菌中的异源表达第73-76页
   ·Streptomyces lividans 中发现一种杀稻瘟菌素脱氨酶(blasticidin S deaminase)及其功能分析第76-86页
     ·在 Streptomyces lividans HXY16 中发现一种杀稻瘟菌素脱氨酶 SLBSD第76-79页
     ·体外分析 SLBSD 的功能第79-82页
     ·SLBSD 体内功能分析第82-85页
     ·SLBSD 的功能讨论第85-86页
   ·杀稻瘟菌素的异源表达第86-87页
   ·亚铁离子对杀稻瘟菌素异源表达的影响第87-90页
   ·杀稻瘟菌素异源表达的结果讨论第90-91页
第四章 杀稻瘟菌素生物合成基因簇中关键基因的体内功能分析第91-115页
   ·blsL的体内功能分析第91-97页
     ·blsL 的基因置换第91-93页
     ·blsL 的基因回补第93-95页
     ·blsL 功能的分析第95-97页
   ·blsF的体内功能分析第97-102页
     ·blsF 的基因置换第97-100页
     ·blsF 功能的分析第100-102页
   ·blsE的体内功能分析第102-107页
     ·blsE 的基因置换第102-105页
     ·blsE 的功能分析第105-107页
   ·blsI的体内功能分析第107-115页
     ·blsI 的基因置换第107-111页
     ·blsI 的回补第111-112页
     ·blsI 的功能分析第112-115页
第五章 杀稻瘟菌素生物合成途径的重推导第115-118页
   ·杀稻瘟菌素与米多霉素生物合成基因簇的比较第115-116页
   ·杀稻瘟菌素生物合成途径的修订第116-118页
第六章 总结与展望第118-122页
   ·本工作主要的创新点第118页
   ·进一步工作和展望第118-122页
参考文献第122-130页
致谢第130-132页
攻读学位期间发表的学术论文第132-135页
附件第135页

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