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急性病毒性坏死病毒分子流行病学调查及奥尔森帕金虫环介导等温扩增检测方法的建立

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
第一章 前言第13-22页
   ·AVNV 研究现状第14-16页
     ·流行病学特征第14-15页
     ·AVNV 病原学研究第15-16页
     ·AVNV 病理学研究第16页
   ·AVNV 检测技术的研究进展第16-18页
     ·酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)第16页
     ·间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence,IIF)第16-17页
     ·聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)第17页
     ·环介导等温扩增法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)第17-18页
     ·荧光定量 PCR 技术第18页
   ·贝类奥尔森帕金虫研究进展第18-20页
     ·奥尔森帕金虫第18-19页
     ·奥尔森帕金虫检测技术的发展第19-20页
   ·病毒性疾病在水生动物中的传播途径第20-21页
     ·垂直传播途径第20页
     ·水平传播途径第20-21页
   ·本论文研究目的和意义第21-22页
第二章 青岛流清河湾与荣成桑沟湾养殖海区栉孔扇贝携带 AVNV 调查第22-33页
   ·实验材料第22-23页
     ·固定海区样品的采集与调查第22页
     ·器材及试剂第22-23页
   ·实验方法第23-25页
     ·栉孔扇贝样品 DNA 的制备第23-24页
     ·PCR 检测采集样品 DNA第24页
     ·琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物第24页
     ·不同养殖模式对疾病控制效果第24-25页
   ·实验结果第25-29页
     ·样品 DNA 制备结果检测第25-26页
       ·样品 DNA 纯度检测第25页
       ·样品 DNA 浓度检测结果第25-26页
     ·PCR 反应结果及产物的鉴定第26-27页
       ·琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 结果第26-27页
     ·样品 DNA 携带 AVNV 检测结果第27-29页
       ·青岛市流清河湾 2010 年 4 月至 2011 年 3 月样品检测结果第27页
       ·荣成市桑沟湾 2010 年 5 月至 2011 年 4 月样品检测结果第27-28页
       ·不同养殖模式对疾病控制效果第28-29页
   ·讨论第29-33页
第三章 青岛流清河湾与荣成桑沟湾栉孔扇贝污损生物携带 AVNV 调查第33-38页
   ·实验材料第34-35页
     ·固定海区样品的采集与调查第34页
     ·器材和试剂第34-35页
   ·实验方法第35页
     ·污损生物样品 DNA 的制备第35页
     ·PCR 检测采集样品 DNA第35页
   ·实验结果第35-36页
     ·附着的污损生物时间分布第35页
     ·所有污损生物核酸样品检测结果第35-36页
   ·讨论第36-38页
第四章 中国各养殖海区 AVNV 流行调查第38-47页
   ·实验材料第38-40页
     ·各地样品采集与调查第38-39页
     ·器材和试剂第39-40页
   ·实验方法第40页
     ·各地样品 DNA 的制备第40页
     ·PCR 检测采集样品 DNA第40页
   ·实验结果第40-44页
     ·所有批次采集样品的检测结果第40-42页
     ·主要养殖贝类检测结果第42-43页
     ·AVNV 的地区分布差异第43-44页
   ·讨论第44-47页
第五章 奥尔森帕金虫环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用第47-61页
   ·实验材料第48-49页
     ·寄生虫和质粒第48-49页
     ·主要试剂第49页
     ·主要仪器第49页
   ·实验方法第49-53页
     ·LAMP 引物设计第49-50页
     ·LAMP 检测 P. olseni 方法的建立和优化第50-51页
     ·LAMP 产物的检测第51页
     ·P. olseni 5.8S rDNA 片段的克隆及质粒标准品的制备第51-52页
     ·LAMP 和常规 PCR 检测 P. olseni 的灵敏度实验第52页
     ·LAMP 检测 P. olseni 特异性实验第52页
     ·LAMP 检测 P. olseni 的应用第52-53页
   ·结果与分析第53-59页
     ·LAMP 反应条件的优化第53-54页
       ·反应温度第53页
       ·Mg~(2+)浓度第53-54页
       ·反应时间第54页
     ·LAMP 反应产物的鉴定第54-55页
     ·P. olseni 5.8S rDNA 质粒标准品的构建与鉴定第55-56页
     ·LAMP 与常规 PCR 检测 P. olseni 灵敏度的比较第56页
     ·LAMP 检测 P. olseni 特异性实验第56-57页
     ·LAMP 检测 P. olseni 的应用第57-59页
   ·讨论第59-61页
参考文献第61-68页
致谢第68-69页

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