| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号说明及縮写 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| ·粘细菌简介 | 第15-17页 |
| ·粘细菌的分类地位及特征 | 第15-16页 |
| ·粘细菌的次级代谢产物 | 第16-17页 |
| ·纤维堆囊菌相关介绍 | 第17-19页 |
| ·纤维堆囊菌基本性质 | 第17-18页 |
| ·纤维堆囊菌次级代谢产物 | 第18-19页 |
| ·埃博霉素简介 | 第19-22页 |
| ·埃博霉素相关研究 | 第19-20页 |
| ·埃博霉素结构及合成酶基因簇特征 | 第20-21页 |
| ·提高埃博霉素产量的相关研究 | 第21-22页 |
| ·原核生物的转录调控 | 第22-27页 |
| ·原核生物的转录调控概述 | 第22-23页 |
| ·转录调控因子的分类 | 第23-24页 |
| ·鉴定并分离转录调控因子的方法 | 第24-27页 |
| ·全基因组预测转录调控因子 | 第24-25页 |
| ·DNA pull-down | 第25-26页 |
| ·转录因子pull-down | 第26-27页 |
| ·本论文开展的思路 | 第27-29页 |
| 第二章 DNA Pull-down Assay分离埃博霉素调控蛋白 | 第29-54页 |
| ·实验材料和仪器试剂 | 第30-34页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31-33页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第33页 |
| ·基因组序列信息 | 第33-34页 |
| ·数据库及分析软件 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-40页 |
| ·引物设计与信息 | 第34页 |
| ·纤维堆囊菌So0157-2基因组的提取 | 第34-35页 |
| ·So0157-2埃博霉素合成基因簇上游调控序列的制备 | 第35-37页 |
| ·So0157-2全蛋白的提取 | 第37页 |
| ·凝胶阻滞实验(band shift assay)DNA和蛋白结合条件的优化 | 第37-38页 |
| ·DNA pull-down assay | 第38-39页 |
| ·Shot-gun质谱鉴定 | 第39-40页 |
| ·实验结果和分析 | 第40-54页 |
| ·So0157-2埃博霉素合成基因簇L游调控序列的制备 | 第40-41页 |
| ·原生质体-超声破碎法和高压破碎法破碎So0157-2的比较 | 第41-42页 |
| ·EMSA(band shift assay)优化DNA和蛋白的结合条件 | 第42-44页 |
| ·DNA pull-down assay | 第44-45页 |
| ·Shot-gun质谱鉴定技术 | 第45-47页 |
| ·DNA Pull-down蛋白的初筛及可能的转录调控蛋白的生物信息学分析 | 第47-54页 |
| 第三章 转录调控因子的异源表达及体外结合活性的验证 | 第54-81页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·菌株和质粒 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第56页 |
| ·数据库及分析软件 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-66页 |
| ·Etfs表达载体的构建 | 第56-63页 |
| ·Etf1、Etf2、Etf3表达预实验 | 第63页 |
| ·Etf2、Etf3表达条件的优化 | 第63-64页 |
| ·Etf1、Etf2、Etf3蛋白的纯化 | 第64-65页 |
| ·EMSA验证Etfs体外DNA结合活性 | 第65-66页 |
| ·DNA片段的合成 | 第65页 |
| ·EMSA的步骤 | 第65-66页 |
| ·实验结果与讨论 | 第66-81页 |
| ·Etfs表达载体的构建 | 第66-71页 |
| ·Etf1、Etf2、Etf3表达预实验 | 第71-75页 |
| ·Etf2、Etf3表达条件的优化 | 第75页 |
| ·Etfs重组蛋白的纯化 | 第75-77页 |
| ·EMSA验证Etfs体外DNA结合活性 | 第77-81页 |
| ·Etf1的体外DNA结合活性 | 第77-80页 |
| ·Etf2和Etf3的体外DNA结合活性 | 第80-81页 |
| 第四章 转录调控因子异源体内结合体系的建立及验证 | 第81-109页 |
| ·实验材料 | 第82-84页 |
| ·菌株和质粒 | 第82-83页 |
| ·培养基 | 第83页 |
| ·主要试剂 | 第83页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-97页 |
| ·异源体内结合体系的相关载体的构建 | 第84-92页 |
| ·质粒共转化流程 | 第92页 |
| ·共转化体系的诱导 | 第92页 |
| ·SDS-PAGE检测Etf1的表达验证共转化体系 | 第92-93页 |
| ·RT-PCR检测Etf1的表达 | 第93-95页 |
| ·Westernblot检测Etf1的表达 | 第95-97页 |
| ·荧光分光光度计检测共转化菌体中的荧光蛋白的表达 | 第97页 |
| ·实验结果与讨论 | 第97-109页 |
| ·体内结合体系相关载体的构建 | 第97-101页 |
| ·用Etf1验证共转化体系 | 第101-106页 |
| ·SDS-PAGE检测Etf1的表达 | 第101-102页 |
| ·RT-PCR检测Etf1的表达验证共转化体系 | 第102-103页 |
| ·Westernblot检测Etf1的表达验证共转化体系 | 第103-104页 |
| ·荧光分光光度计检测共转化菌体中的荧光蛋白的表达 | 第104-106页 |
| ·共转化体系验证Etf2的体内结合活性 | 第106-107页 |
| ·共转化体系验证Etf3的体内结合活性 | 第107页 |
| ·共转化体系验证ChiR的体内结合活性 | 第107-109页 |
| 总结 | 第109-111页 |
| 附录 | 第111-119页 |
| 参考文献 | 第119-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读硕士期间主要研究成果 | 第131-132页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第132页 |
