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拟南芥PPR蛋白PDM1调控rpoA基因转录后表达的研究

中文摘要第1-7页
Abstract第7-10页
1 引言第10-25页
   ·叶绿体的起源学说第10-12页
     ·内共生起源学说第10-11页
     ·非共生起源学说第11-12页
   ·拟南芥叶绿体基因组的结构和表达调控第12-16页
     ·拟南芥叶绿体基因组结构第12-14页
     ·叶绿体基因的转录第14-15页
     ·叶绿体基因的转录后加工第15-16页
   ·PPR 蛋白家族第16-21页
     ·PPR 家族蛋白的特点第17-18页
     ·拟南芥 PPR 家族蛋白的分类第18-20页
     ·PPR 家族蛋白的功能第20-21页
   ·拟南芥 PPR 蛋白 PDM1 的研究进展第21-24页
     ·本实验室之前的研究结果第21-24页
       ·PDM1 缺失突变体的表型及 PDM1 蛋白亚细胞定位第21-23页
       ·PDM1 影响到了拟南芥叶绿体 rpoA 前体 mRNA 的加工第23-24页
   ·本研究的目的和意义第24-25页
2 材料和方法第25-45页
   ·材料第25-27页
     ·植物材料第25页
     ·主要仪器第25页
     ·菌株和质粒第25-26页
     ·抗生素第26页
     ·培养基配方第26页
     ·其他第26-27页
   ·实验方法第27-45页
     ·拟南芥种植,转染与转基因植株的筛选第27-29页
       ·拟南芥无菌培养第27-28页
       ·拟南芥土壤种植和拟南芥转染第28页
       ·拟南芥转基因植株的筛选第28-29页
     ·感受态的制备,转化与转化子的鉴定第29-31页
       ·热击 E.coli 感受态的制备第29-30页
       ·大肠杆菌的转化第30页
       ·质粒的小量制备第30页
       ·PCR 鉴定体系及酶切鉴定体系第30-31页
     ·农杆菌感受态的制备,转化第31-32页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第31页
       ·农杆菌的遗传转化第31-32页
     ·载体构建第32页
     ·DNA 和 RNA 的抽取第32-33页
       ·DNA 的抽取第32-33页
       ·RNA 的抽取第33页
     ·Northern blot第33-36页
       ·Dig 探针的制备:第33页
       ·RNA 甲醛变性凝胶电泳第33-34页
       ·RNA 甲醛变性胶转膜第34页
       ·预杂交和杂交第34页
       ·洗膜,封闭与显影检测第34-36页
     ·Western blot第36-39页
       ·SDS-PAGE 电泳第37页
       ·样品的印迹(转膜)第37-38页
       ·免疫反应第38-39页
     ·RNA 免疫共沉淀技术(RIP)第39-43页
       ·拟南芥幼苗的种植和固定第39-40页
       ·特定的 RNA 蛋白复合物的免疫沉淀反应第40-43页
     ·蛋白质免疫共沉淀技术(Co-IP)第43-45页
3 结果和讨论第45-56页
   ·拟南芥 PDM1 基因编码一个 PLS 亚家族蛋白第45-46页
   ·拟南芥 PDM1 蛋白的缺失影响 PEP 活性第46-47页
   ·pdm1-1 突变体中 rpoA 前体 mRNA 的加工缺陷导致 RpoA 蛋白的积累减少第47-49页
   ·PDM1-FLAG 转基因植株的筛选和互补鉴定第49-50页
   ·PDM1 蛋白与 rpoA 多顺反子转录本相结合第50-51页
   ·叶绿体内其他多顺反子转录模式的检测第51-52页
   ·与 PDM1 相互作用的其他蛋白质的检测第52页
   ·讨论第52-55页
     ·拟南芥 PDM1 蛋白对叶绿体发育具有重要作用第53-54页
     ·PDM1 参与了 rps11-rpoA 之间的核酸内切过程第54-55页
   ·展望第55-56页
致谢第56-57页
参考文献第57-61页
已发表论文第61页

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