| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-16页 |
| 课题的提出 | 第16-17页 |
| 第一部分 巴斯德毕赤酵母的转化，鉴定及筛选 | 第17-33页 |
| 一 仪器和试剂 | 第17-19页 |
| ·试剂和材料 | 第17-18页 |
| ·仪器 | 第18-19页 |
| 二 主要试剂的配制 | 第19-22页 |
| 三 实验方法 | 第22-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的转化 | 第22页 |
| ·酵母转化子的PCR鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组菌株的表达量筛选 | 第23页 |
| ·表达菌株筛选活性测定方法 | 第23-24页 |
| ·活性定量方法的建立 | 第24-25页 |
| ·TFPI的活力单位数计算 | 第25-26页 |
| ·rhTFPI的诱导表达 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| 四 实验结果和讨论 | 第27-31页 |
| ·转化结果 | 第27页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第27-28页 |
| ·表达菌株筛选结果 | 第28-29页 |
| ·rhTFPI活性测定标准曲线的建立 | 第29-30页 |
| ·活性测定结果 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE电泳结果 | 第31页 |
| 五 结论 | 第31-33页 |
| 第二部分 摇瓶中表达条件的优化 | 第33-42页 |
| 一 试剂、材料和仪器 | 第33-35页 |
| ·试剂和材料 | 第33页 |
| ·仪器 | 第33-35页 |
| 二 优化因素的选择 | 第35-36页 |
| 三 实验方法 | 第36-38页 |
| ·甲醇浓度优化 | 第36-37页 |
| ·pH值优化 | 第37-38页 |
| 四 实验结果及讨论 | 第38-41页 |
| ·甲醇浓度优化结果 | 第38-40页 |
| ·pH值优化 | 第40-41页 |
| 五 结论 | 第41-42页 |
| 第三部分 发酵罐高密度诱导表达 | 第42-57页 |
| 一 试剂材料和仪器 | 第42-44页 |
| ·试剂和材料 | 第42页 |
| ·仪器 | 第42-44页 |
| 二 主要试剂的配制 | 第44-46页 |
| 三 实验方法 | 第46-49页 |
| ·菌种准备 | 第46页 |
| ·发酵罐及培养基灭菌 | 第46-47页 |
| ·发酵罐接种并开始发酵 | 第47-48页 |
| ·添加剂的影响 | 第48页 |
| ·发酵罐与摇瓶的比较 | 第48页 |
| ·发酵罐高密度表达与摇瓶表达SDS-PAGE电泳比较 | 第48-49页 |
| 四 实验结果 | 第49-55页 |
| ·添加剂的影响 | 第49-52页 |
| ·摇瓶和发酵罐的对比 | 第52-54页 |
| ·SDS-PAGE电泳比较摇瓶和发酵罐的表达量 | 第54-55页 |
| 五 结论 | 第55-57页 |
| 第四部分 rhTFPI的纯化 | 第57-64页 |
| 一 试剂和仪器 | 第57-59页 |
| ·实验试剂 | 第57页 |
| ·实验仪器 | 第57-59页 |
| 二 主要试剂的配制 | 第59-60页 |
| 三 实验方法 | 第60-62页 |
| ·样品的准备 | 第60页 |
| ·表达上清的超滤浓缩 | 第60页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第60-61页 |
| ·Q-柱纯化(强阴离子交换层析) | 第61-62页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第62页 |
| 四 实验结果 | 第62-63页 |
| ·活性测定和比活性计算 | 第62-63页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第63页 |
| 五 结论 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 附录: 文中所用到的主要实验方法 | 第69-75页 |