| 英文缩略词表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 第一章 HBV 基因组全面分析与SIRNA 的设计合成 | 第18-33页 |
| 1. 引言部分 | 第18-20页 |
| ·乙肝基因组的结构以及乙肝病毒致病基因的异质性 | 第18-19页 |
| ·靶向HBV 的siRNA/shRNA 设计的研究现状 | 第19-20页 |
| 2. 实验部分 | 第20-23页 |
| ·研究技术路线 | 第20页 |
| ·实验方法与软件 | 第20-23页 |
| ·HBV m RNA 序列的获得 | 第20-21页 |
| ·序列同源性比对与siRNA 的基因型同源性分析 | 第21页 |
| ·靶mRNA 二级结构的模拟 | 第21-22页 |
| ·siRNA 二级结构热动力学参数分析 | 第22页 |
| ·siRNAs 二级结构分析 | 第22-23页 |
| 3. 实验结果 | 第23-33页 |
| ·基于部分中国HBV B、C 基因型和U9555 1 序列的siRNA 筛选 | 第23-24页 |
| ·siRNA 的一级结构基因型同源性分析 | 第24-25页 |
| ·靶mRNA 二级结构的模拟和分析 | 第25-31页 |
| ·HBV 各转录本的核苷酸序列 | 第25-27页 |
| ·RNAstructure4.4 对siRNA 二级结构热动力学参数的分析 | 第27-31页 |
| ·siRNA 的设计与合成 | 第31-33页 |
| 第二章 评价SIRNA 抑制病毒活性的定量分析方法的建立 | 第33-40页 |
| 1. 引言部分 | 第33页 |
| 2. 实验部分 | 第33-37页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第33-34页 |
| ·实验试剂 | 第33-34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·细胞株 | 第34页 |
| ·实验方法的建立 | 第34-37页 |
| ·细胞培养与siRNA 转染条件优化 | 第34页 |
| ·HBsAg 酶联免疫吸附的定量检测 | 第34-35页 |
| ·实时定量RT-PCR 相对定量方法 | 第35-37页 |
| 3. 实验结果 | 第37-40页 |
| ·转染条件的优化 | 第37-38页 |
| ·HBsAg ELISA 定量方法学结果 | 第38-39页 |
| ·实时荧光相对定量结果 | 第39-40页 |
| 第三章 SIRNA 体外抑制病毒表达活性与QSAR 分析 | 第40-48页 |
| 1. 实验方法 | 第40-41页 |
| ·细胞转染、ELISA 定量检测、mRNA 荧光相对定量方法 | 第40页 |
| ·siRNA 基因型同源性分析与评分系统 | 第40页 |
| ·方差分析有效siRNA 验证与量效关系分析 | 第40页 |
| ·siRNA 有效性结果中mRNA 和HBsAg 相关性分析 | 第40页 |
| ·基于多元线性回归方程的构效关系分析 | 第40-41页 |
| ·一级结构构效关系分析 | 第40页 |
| ·二级结构构效关系分析 | 第40-41页 |
| 2. 实验结果 | 第41-48页 |
| ·不同剂量下siRNA 对S/P mRNA 和HBsAg 的抑制情况 | 第41-42页 |
| ·siRNA 在不同剂量下抑制S/P mRNA 表达结果 | 第41-42页 |
| ·不同siRNA 在不同剂量下抑制HBsAg 表达结果 | 第42页 |
| ·剂量依赖性分析和有效性排序 | 第42-43页 |
| ·siRNA 抑制mRNA 和HBsAg 表达的相关性分析 | 第43-46页 |
| ·一级结构构效关系的多元线性回归分析 | 第46页 |
| ·二级结构构效关系的多元线性回归分析 | 第46-48页 |
| ·二级结构热动力学参数与siRNA 构效关系分析 | 第46页 |
| ·二级结构单元与siRNA 构效关系分析 | 第46-48页 |
| 第四章 SIRNA 活性评价与不同检测终点的关系初步研究 | 第48-58页 |
| 1 引言部分 | 第48页 |
| 2 实验部分 | 第48-50页 |
| ·实验试剂 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·细胞转染和样品检测 | 第48页 |
| ·实时定量RT-PCR 相对定量方法确定m RNA 水平 | 第48-49页 |
| ·HBeAg ELISA 定量检测方法的建立和确证 | 第49页 |
| ·细胞tDNA 和cccDNA 的获得 | 第49页 |
| ·cccDNA 检测方法的建立和确证 | 第49-50页 |
| ·统计学分析 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-58页 |
| ·HBeAg ELISA 定量结果 | 第50-51页 |
| ·cccDNA 检测的方法学确证结果 | 第51-52页 |
| ·对细胞cccDNA 检测终点的抑制作用 | 第52页 |
| ·多条siRNA 对各检测终点的抑制情况 | 第52-54页 |
| ·多元线性回归结果 | 第54页 |
| ·mRNA 水平与蛋白水平相关性分析 | 第54-55页 |
| ·靶向S 区和C 区的siRNA 对不同检测终点的统计学差异 | 第55页 |
| ·有效性排序 | 第55-58页 |
| 讨论 | 第58-66页 |
| 1. 基于复杂基因组设计siRNA 药物候选序列和QSAR 分析的前提 | 第58-59页 |
| 2. 靶向复杂基因组的siRNA 构效关系的初步研究与规律 | 第59-63页 |
| ·一级结构构效关系 | 第59-60页 |
| ·二级结构构效关系 | 第60-62页 |
| ·该部分研究中的不足与问题 | 第62-63页 |
| 3. 复杂基因检测终点对于评判siRNA 活性的重要性 | 第63页 |
| 4. 可能有益于复杂基因优化设计的规律 | 第63-64页 |
| 5. 靶向HBV 的siRNA 的成药的研发前景 | 第64-66页 |
| ·基因型同源保守性对RNAi 的抗药性的重要意义 | 第64页 |
| ·有待深入研究的问题 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-80页 |
| 个人简历 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
