| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| ·乙脑的历史及流行病学 | 第13-15页 |
| ·乙脑的历史 | 第13-14页 |
| ·乙脑的流行病学 | 第14-15页 |
| ·乙脑的病原学特性 | 第15-16页 |
| ·病毒的分类及理化特性 | 第15页 |
| ·乙脑的生物学特性 | 第15-16页 |
| ·致病机制 | 第16页 |
| ·乙脑病毒的分子生物学特性 | 第16-19页 |
| ·基因结构与功能 | 第16-17页 |
| ·蛋白质 | 第17-18页 |
| ·非结构蛋白 | 第18-19页 |
| ·乙脑的诊断方法 | 第19-20页 |
| ·病原学诊断 | 第19页 |
| ·血清学诊断 | 第19-20页 |
| ·其他诊断方法 | 第20页 |
| ·乙脑的防治 | 第20-21页 |
| ·乙脑疫苗研究进展 | 第21-25页 |
| ·乙脑传统疫苗 | 第21-23页 |
| ·乙脑新型疫苗 | 第23-25页 |
| ·杆状病毒表达载体研究进展 | 第25-28页 |
| ·杆状病毒表达系统简介 | 第25-26页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体的研究 | 第26-27页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体在疫苗研究中的应用 | 第27-28页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 第三章 材料与方法 | 第29-43页 |
| ·实验材料 | 第29-34页 |
| ·毒株、细胞与菌种 | 第29页 |
| ·载体与质粒 | 第29-31页 |
| ·主要药品及试剂 | 第31页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第31页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第31-32页 |
| ·缓冲液 | 第32-34页 |
| ·实验动物 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-43页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第34页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第34页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第35页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第35-36页 |
| ·脂质体介导转化法(Lipfectin2000,Invitrogen Corp.) | 第36页 |
| ·构建重组杆状病毒的操作流程 | 第36-37页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第37-38页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第38页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第38页 |
| ·重组杆状病毒转导PK-15细胞 | 第38页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第38页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的体外表达 | 第38-39页 |
| ·杆状病毒介导的表达JEVE的重组毒疫苗动物试验 | 第39页 |
| ·E-ELISA方法的建立 | 第39页 |
| ·微量中和试验 | 第39-40页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的分离 | 第40页 |
| ·实时荧光定量PCR检测免疫小鼠脾细胞中的IFN-γ相对表水平 | 第40-41页 |
| ·IFN-γ的定量检测(双抗体夹心ELISA) | 第41-42页 |
| ·实时荧光定量PCR检测攻毒小鼠脑组织内JEV相对含量 | 第42页 |
| ·统计学方法 | 第42-43页 |
| 第四章 结果与分析 | 第43-54页 |
| ·表达JEV E基因的DNA疫苗pc-E的构建 | 第43-44页 |
| ·真核表达质粒pc-E的构建 | 第43-44页 |
| ·pc-E介导E基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第44页 |
| ·表达JEV E蛋白的重组杆状病毒BV-G-E的构建 | 第44-49页 |
| ·转移载体pFast-G-E的构建 | 第44-45页 |
| ·重组穿梭载体(bacmid-G-E)的构建 | 第45-46页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-E的获得 | 第46-47页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-E介导E蛋白在哺乳动物中的表达情况 | 第47-48页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-E的纯化与毒价的测定 | 第48-49页 |
| ·重组杆状病毒BV-G-E的小鼠免疫试验 | 第49-54页 |
| ·免疫小鼠的ELISA抗体水平 | 第49-50页 |
| ·免疫小鼠的中和抗体水平 | 第50页 |
| ·实时荧光定量PCR检测免疫小鼠脾细胞中IFN-γ mRNA表达 | 第50-51页 |
| ·ELISA法检测免疫小鼠脾细胞分泌的IFN-γ水平 | 第51-52页 |
| ·杆状病毒BV-G-E对致死性JEV的保护率 | 第52-53页 |
| ·实时荧光定量PCR检测攻毒小鼠脑组织中JEV含量 | 第53-54页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第54-59页 |
| ·讨论 | 第54-58页 |
| ·VSV-G对杆状病毒载体的修饰 | 第54-55页 |
| ·杆状病毒转导哺乳动物细胞的方法 | 第55-56页 |
| ·重组杆状病毒诱导的免疫反应 | 第56-57页 |
| ·重组杆状病毒对致死性乙脑强毒的保护力 | 第57-58页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68页 |
